文档介绍：蛋白质含量测定
2004-0-11
12/14/2017
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介绍
蛋白质含量测定方法
Lowry法(酚试剂法)
考马斯亮兰G-250染色法
双缩脲法
微量凯氏定氮法
紫外光谱215和225吸收差法
紫外光谱280和260吸收差法
紫外光谱280吸收法
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方法
原理
灵敏度(mg/ml)
备注
Lowry法
碱性条件下蛋白质与铜作用生成蛋白质铜复合物该复合物随之将磷钼酸磷钨酸还原成蓝色复合物
-
650nm
G-250染色法
-250 在酸性溶液中为棕红色当它与蛋白质通过范德华键结合后变为蓝色
-1
595nm
凯氏定氮法
有机物与浓硫酸共热,有机氮转变为无机氮氨,氨与硫酸作用成硫酸铵,,根据此过量酸液被中和的程度即可计算出样品的含氮量,再推知蛋白含量
-2
双缩脲法
在碱性溶液中双缩脲与铜离子结合形成复杂的紫红色复合物。蛋白质及多肽的肽键与双缩脲的结构类似,也能与铜离子在碱性环境中形成紫红色复合物。
1-10
54Onm
215&225吸收差法
蛋白质的肽键在200-250nm有强的紫外吸收,且波长越短光吸收越强。若选用215nm可减少干扰及光散射。用215nm 和225nm 光吸收差值可减少非蛋白质成分引起的误差。
-
mg/ml=(A215-A225)
280吸收法
蛋白质中的W和Y残基的苯环中含共轭双键,在280nm有最大吸收
-1
280nm
280&260吸收差法
核酸260nm的吸收比280nm强,而蛋白质正相反,
-1
mg/ml=-
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Lowry法
标准曲线的绘制
方法与材料