文档介绍：第三章酶的分离纯化
内容
概述
破碎与提取
沉淀法
层析分离
电泳
其它分离方法
酶的剂型与保存
细胞结构与酶分布
第一节概述
一、酶分离纯化的一般原则:
,防止酶变性失活
1)酶纯化一般在低温条件下进行(0~4℃),
2) 各种溶液应该用缓冲液,pH应调到使酶最稳定的pH。
3) 各种溶液中还可以加入酶保护剂。
2 建立一个可靠和快速的测活方法
方法专一、灵敏、精确、简便、经济
3. 酶原料的选择
选择目的酶含量丰富的原料,且考虑原料的来源、取材方便、经济等因素。
4. 酶的提取
5. 酶的提纯
产率=(目的酶的总活力/粗抽提液中目的酶总活力)*100%
反映提纯过程酶活力的损失情况
提纯倍数=目的酶的比活力/粗抽提液中目的酶比活力
提纯方法的效率

当把酶提纯到一恒定的比活时,即可认为酶已纯化,仍需电泳、层析、离心等方法对纯化的酶进行纯度检验。
酶的提取、分离纯化技术路线
细胞破碎
酶提取
酶分离纯化
酶浓缩
酶贮存
动物、植物或微生物细胞
发酵液
离心分离,过滤分离,沉淀分离,层析分离,电泳分离,萃取分离,结晶分离等。
二、酶纯化过程的三个阶段
粗蛋白(crude protein) 采样破细胞提取全部蛋白,多用盐析沉淀法。
部分纯化(partially purified) 初步的纯化,使用各种柱层析法。
均质纯化(homogeneous) 目的酶的进一步精制,可用制备式电泳或HPLC。