文档介绍：实验四细胞组分的分离和鉴定
目的:
了解用细胞匀浆和差速离心的方法分级分离细胞组分的原理及过程;
熟悉离心机、匀浆器的使用方法
原理:
细胞内各种结构的比重和大小都不相同,在同一离心场内的沉降速度也不相同,据此,可用不同的转速离心分离,使细胞内各种碎片和细胞器分级分离出来。
分为:匀浆、分级分离、分析三个步骤
:破坏细胞;根据材料性质不同,放到不同的匀浆溶液中,在匀浆器中研磨,细胞被机械地碾碎成为匀浆。
:把细胞匀浆放入在一定液体(介质)环境中,在离心机中使用不同转速离心分离处理。由于离心力的作用,细胞内各种碎片和细胞器被分级分离出来。
(1) 差速离心法:是指由低速到高速分级分离的一种方法。先低速沉淀较大颗粒如细胞核,再高速沉淀原先悬浮在上清液中的较小颗粒。
(2) 密度梯度离心法:采用密度具有梯度的介质,使介质分为不同层次,由上到下密度依次增大,细胞匀浆安置在离心管最上层,离心,大小、形态、密度不同的颗粒(细胞器)由于沉降系数不同,以不同的速度向管下移动,集中在不同的区域。
3. 分析:用细胞化学法对分离出来的细胞组分作形态和生化鉴定
步骤: 处死取肝洗净吸干剪碎(+2ml蔗糖) 匀浆过滤(到6ml蔗糖) 制片1# 配平离心(2800转8分)
沉淀上清液
到5ml蔗糖、混匀制片2#
配平、离心 、预冷
2800转8分对称、离心 12000转10分
弃上清、加少量蔗糖制悬液弃上清、留沉淀、加少量蔗糖悬浮
先加一半混匀,再加满,预冷
制片3# 离心
12000转10分
上清制片4、沉淀制片5
1、2、3片凉干,乙醇固定(5分),甲-派染色(20分),清洗
4、5片詹纳斯绿染色(2-3分),盖上盖玻片
结果观察: 1号片
3号片
5号片
实验报告:
预期结果实际结果
1号片
2号片
3号片
4号片
5号片