文档介绍：中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SNSN/T××××—××××橡胶白根病菌检疫鉴定方法MethodsforquarantineandIdentificationofRigidoporuslignosus(Klotzsch)Imaz.(征求意见稿)××××-××-××实施××××-××-××发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局前言本文件依据国标GB/—2009起草编制。本文件由全国植物检疫标准化技术委员会(SAC/TC271)提出并归口。本标准负责起草单位:中国海南出入境检验检疫局。本标准参加起草单位:中国宁波出入境检验检疫局、中国广东出入境检验检疫局本标准起草人:韩玉春、刘福秀、徐卫、李伟东、林明光。橡胶白根病菌检疫鉴定方法1适用范围本标准规定了橡胶白根病菌的检疫鉴定方法本标准适用于植物检疫中橡胶白根病菌的检疫鉴定。(Rigidoporuslignosus(Klotzsch)Imaz.),属于担子菌亚门(Basidiomycotina),层菌纲(Hymenomycetes),无隔担子菌亚纲(Holobasidiomycetidae),非褶菌目〔Aphyllophorales〕真菌。,主要寄生橡胶属植物的根部,离开寄主织在土中不能存活。。该菌在侵染植物的过程中能产生粗细不一的根状菌索,菌素多时会形成一层白色菌膜。天气潮湿时在病树病变根部长出子实体。该病菌主要是通过根系接触,借根状菌索蔓延而传播,也能借子实体产生的担孢子经过气传沉降到树桩切面或根系伤口形成新的侵染源,再经过根系接触传播该病菌的危害症状、病原菌的形态、病原菌的培养及致病性测定是鉴定橡胶白根病菌的的依据。3器材和试剂PCR仪、超净工作台、灭菌锅、制冰机、核酸蛋白分析仪、高速冷冻离心机,台式小型离心机、超低温冰箱、常规冰箱、旋涡震荡器、微量进样器、电泳仪、凝胶成像系统。生物显微镜、生物培养箱、高压灭菌锅、天平、超净工作台、酒精灯、三角瓶、培养皿、试管、载玻片、盖玻片、接种针、接种环、移液器、小刀、剪刀、镊子、玻璃棒等。培养基和试剂:PCR缓冲液、MgCl2、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物等。2%燕麦琼脂培养基、5%的次***酸钠溶液等。,症状描述见附录A。,在盒内铺上保湿滤纸,将采集的的病根组织样品置于滤纸上,喷雾保持病根高度湿润,置25℃培养箱内在自然光或弱光下培养,3d后取出病根观察病斑上有无菌索或子实体产生。,用5%的次***酸钠溶液消毒5min,灭菌水洗三至四次,将病斑组织移到2%燕麦琼脂培养基中,置室温(25±1℃)培养3d后观察菌落的形态、颜色、子实体产生的情况。,按CTAB法提取DNA(参见附录B)(参见附录C):,取分离纯化得到的担孢子,接种橡胶根部。具体做法为:截取一些直径约1cm的胶根,洗去根上的土,截成6cm长的根块,在121℃蒸汽中高压灭菌15min