文档介绍：高中生物基因工程核心知识点总结
　高中生物基因工程核心知识点总结
概念:
基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计,通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性,,又叫做DNＡ重组技术。
(一)基因工程的基本工具
1.“分子运输车”-—载体
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存.
②具有一至多个限制酶切点，供外源DNＡ片段插入.
③具有标记基因，供重组DＮA的鉴定和选择。
（２）最常用的载体是？？质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNＡ分子。
（3）其它载体: 噬菌体的衍生物、动植物病毒
2。“分子手术刀"——限制性核酸内切酶(限制酶)
（1）来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。
(2）功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。
(3)结果:经限制酶切割产生的DN***段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端.
3。“分子缝合针”—-DNA连接酶
(1)两种DNＡ连接酶(Ｅ？cｏliDNA连接酶和Ｔ4-ＤNA连接酶）的比较:
①相同点:都缝合磷酸二酯键。
②区别：E？colｉＤNA连接酶来源于Ｔ4噬菌体,只能将双链DＮ***段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而Ｔ4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。
（2）与DＮA聚合酶作用的异同：DＮA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端,形成磷酸二酯键。DNＡ连接酶是连接两个DＮＡ片段的末端，形成磷酸二酯键。
（二)基因工程的基本操作程序
第一步：目的基因的获取
1。目的基因是指:　编码蛋白质的结构基因。
2。原核基因采取直接分离获得,真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。
3．PCR技术扩增目的基因
（1）原理：DNA双链复制
(2）过程：第一步：加热至９０～95℃DＮA解链;第二步：冷却到55～6０℃,引物结合到互补DNA链；第三步：加热至7０～７5℃,热稳定ＤNA聚合酶从引物起始互补链的合成。
第二步：基因表达载体的构建
1。目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
:目的基因+启动子+终止子+标记基因
（1)启动子：是一段有特殊结构的DN***段，位于基因的首端,是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质.
(2）终止子:也是一段有特殊结构的DN***段，位于基因的尾端.
(３）标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素基因.
第三步：将目的基因导入受体细胞_
1。转化的概念：是目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
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将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法，其次还有　基因枪法和花粉管通道法等.
将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是受精卵。