文档介绍：基因诊断与基因治疗
(gene diagnosis and therapy)
本章讨论二大方面内容
基因诊断
基因治疗
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一. 基因诊断概念:
利用现代分子生物学和分子遗传学的技术方法,直接检测基因结构及其表达水平是否异常,从而对疾病作出诊断的方法。
第一节基因诊断
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二. 基因诊断特点:
针对性强,特异性高
检测灵敏度和精确性高
实用性强,诊断范围广
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三. 基因诊断常用技术方法
核酸分子杂交技术
聚合酶链反应(PCR)技术
生物芯片
基因测序
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(一)核酸分子杂交技术
核酸分子杂交
是指单链核酸分子(DNA或RNA)在特定条件下,与另一条互补的特异核酸链形成稳定双链的过程。
主要依据: 碱基互补、变性和复性
DNA与DNA杂交: A=T、 G≡C ;
DNA与RNA杂交: A=U、 G≡C ;
变性:
在一定温度下,使核酸双链解开为两条单链;
复性:
随温度逐渐恢复,变性的两条单链重新形成互补双链
碱基互补
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hybridization
DNA:DNA 5’ A T G C C G A T
3’ T A C G G C
DNA:RNA 5’ A T G C G T A
3’ U A C G C A U
RNA:RNA 5’ A U G C U A C G
3’ U A C G A U G C
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利用核酸双链的碱基互补、变性和复性的原理,可以用已知碱基序列的单链核酸片段作为探针,与待测样本中的单链核酸互补配对,以判断有无互补的同源核酸序列的存在。
核酸探针
是指带有标记的某一特定DNA或RN***断,能与待测样本中单链核酸分子互补配对结合,进而检测同源序列。
探针标记物
有放射性核素或非放射性核素(生物素、***、荧光素等)两大类。
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液相杂交:
待测核酸样本与特异性探针同时溶于杂交液中进行杂交反应;
固相杂交:
待测核酸样本先结合到固相支持物上,再与溶液中的特异性探针进行杂交反应。

常用固相杂交支持物:
***纤维素膜、尼龙膜等---
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(固相杂交)操作程序
制备待测核酸样品
分离、变性、转移、固化DN***段
杂交
加入标记核酸探针
检测杂交信号
标记核酸探针
预杂交
制备核酸探针
漂洗去除未参与杂交的标记探针
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