文档介绍：实验五 肠道杆菌
实验内容
操作
肥达试验
示教
粪便肠道致病菌的分离和鉴定
实验目的
熟悉肥达试验的操作方法、结果观察及分析
熟悉肠道杆菌在选择鉴别培养基上的生长特点
了解粪便标本肠道杆菌的分离鉴定
肥达试验(Widal Test)
原理:用已知伤寒沙门菌O、H抗原,以及甲型副伤寒、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验,测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。
用途:辅助诊断伤寒,副伤寒
方法:
取小试管32支,分成4排,每排8支,依次标号。
。
,吸打混匀, 加入第2管作对倍稀释…… ,第8管为对照。2~3排按同法稀释。
.…1列的顺序, ; ;同样对第3排各管加甲型副伤寒(PA) ;第4排各管加乙型副伤寒(PB) 。
将各管混匀,置37℃水浴箱中16~18小时后观察结果。
肥达试验结果观察
根据凝集反应的强弱,分别以“++++、+++、++、+”记录:
++++:液体清澈透明,菌体全部被凝成块,沉于管底。
+++:液体较透明,大部分菌体被凝集而沉于管底。
++:液体稍透明,管底有少量凝集沉淀物。
+:液体较混浊,可见极少量凝集物。
-:液体混浊,细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点(与对照管相似)。
血清效价(或滴度):能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集(即“++”凝集)的血清最高稀释倍数,称为血清的效价。血清的效价代表着血清中抗体的含量,其效价愈高,所含抗体的量愈多。如血清最低稀释倍数(1∶40)仍无凝集,则视为阴性或效价低于1∶40;如血清的最高稀释倍数(1∶1280)仍完全凝集,则示血清效价高于1∶1280。
SS平板-分离肠道病原菌的强选择培养基
成分和作用:
基础培养基:提供氮源和碳源
胆盐、枸橼酸钠、煌绿:可抑制肠道非致病菌的生长,而对肠道致病菌抑制作用弱。
乳糖,中性红(-,红→橙黄) :致病菌不分解乳糖,但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色;大肠杆菌分解乳糖产酸,菌落呈红色
病原菌:小,无色,半透明
非致病菌:大,红色
EMB(Eosin Methyl Blue)平板-分离肠道病原菌的弱选择培养基
成分和作用:
基础培养基:提供氮源和碳源
伊红、美蓝:可抑制肠道非致病菌的生长,而对肠道致病菌抑制作用弱。
乳糖,伊红、美蓝:致病菌不分解乳糖→菌落无色半透明;大肠杆菌分解乳糖产酸,菌落呈紫黑色
病原菌:半透明,无色
非致病菌:紫黑色