文档介绍：实验一 酶联免疫吸附试验(ELISA)
抗原
抗体
抗原抗体反应
Hv
Lv
Hc
Lc
Ⅰ抗原抗体反应的特征
“Lock and Key”模式: 高度特异性
非共价键结合
氢键、静电引力、范德华力、疏水键
可逆性结合
亲和力;亲合力
抗原抗体比例
抗原的理化性质
温度: 37℃~56℃
PH值: 6~8
离子浓度: % NaCl
Ⅱ影响抗原抗体反应的因素
凝集反应
沉淀反应
补体结合反应
中和反应
Ⅲ经典抗原抗体反应
免疫标记技术
定义:
将抗原-抗体反应与标记技术相结合,用放射性同位素、酶或荧光素标记的已知抗体或抗原,通过检测标记物,间接测定未知的抗原或抗体。
分类:
放射免疫测定法:131I,32P
免疫荧光技术:FITC(异硫***酸荧光素),PE(藻红蛋白)
免疫酶测定法:HRP,AP
免疫酶测定法 (Enzyme ImmunoAssay,EIA)
用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。
辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶(AP)
特点:
高度特异性:保持抗原抗体反应的特异性
高灵敏度:酶催化底物显色的高效性,p***平微量检测
定性定量检测:反应液颜色深浅或光密度值
分类:
酶联免疫吸附试验:可溶性抗原或抗体
酶免疫组化法: 组织中或细胞表面的抗原。
酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
用酶标记抗原或抗体检测液体(血液、细胞液)中未知抗体或抗原的方法。
间接法(Indirect ELISA):
将已知抗原吸附于固相载体,酶标记二抗
检测液相中未知抗体
双抗体夹心法(Sandwich ELISA):
将已知抗体吸附于固相载体,酶标记一抗
检测液相中的可溶性抗原
petitive ELISA) :
将已知抗体或抗原吸附于固相载体,酶标记抗原或抗体
检测液相中的可溶性抗原或抗体
酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay,ELISA)
3. 原理(以双抗体夹心法为例):
显色
抗体
待测抗原
酶标抗体
E
E