文档介绍：酶联免疫吸附试验
有间接法、夹心法、双夹心法、阻断ELISA、酶标抗原竞争法、酶标抗体直接竞争法、SPA-ELISA、BA系统-ELISA等

通过本次实验,学生可理解和掌握酶联免疫吸附试验(ELISA)(间接法-ELISA)原理和方法。

间接法-ELISA:
在聚苯乙烯微量滴定板孔中预先吸附某种抗原,将待测抗体加到孔中,充分反应后充分洗涤;再加酶标抗抗体,充分反应后充分洗涤;之后加酶的底物,进行显色反应。显色后,以肉眼观察和分析结果,或在酶标测定仪上测定吸光值,依据对照孔的吸光值和待测孔的吸光值的比值,判定结果。

聚苯乙烯微量滴定板,兔抗鸡IgG辣根过氧化物酶标记抗体,鸡传染性法氏囊病病毒抗原,待测鸡血清,鸡传染性法氏囊病参考阳性血清,鸡传染性法氏囊病参考阴性血清,、(%吐温-20)(洗涤液),、(包被液),,,30mg/mlH2O2,2mol/L硫酸(终止液),5%脱脂奶粉(封闭液),邻苯二***。
底物液,必须临用前配制,置于棕色瓶中,配方为:

30mg/mlH2O2 50ul
邻苯二*** 4mg

(1)包被:在聚苯乙烯微量滴定板上,选择一排孔,在每排的1-6孔加75ul包被液,在第1-5孔中加75ul鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗原液,置37℃恒温箱、30min,或4℃、过夜。弃去孔中液体,甩干净,加200ul洗涤液,放置1min,弃去,如此,洗涤3次。
(2)封闭:在第1-6孔中加200ul封闭液,置37℃恒温箱、30min。弃去孔中液体,加200ul洗涤液,放置1min,弃去,如此,洗涤3次。
(3)在第1孔中加75ul待测鸡血清,作倍比稀释,至第3孔。第4孔中加75ul鸡传染性法氏囊病参考阳性血清。第5孔中加75ul鸡传染性法氏囊病参