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人类染色体疾病的诊断.ppt

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人类染色体疾病的诊断.ppt

上传人:相惜 2024/5/14 文件大小:4.59 MB

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人类染色体疾病的诊断.ppt

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文档介绍:该【人类染色体疾病的诊断 】是由【相惜】上传分享,文档一共【51】页,该文档可以免费在线阅读,需要了解更多关于【人类染色体疾病的诊断 】的内容,可以使用淘豆网的站内搜索功能,选择自己适合的文档,以下文字是截取该文章内的部分文字,如需要获得完整电子版,请下载此文档到您的设备,方便您编辑和打印。第五节荧光原位杂交〔FISH〕整理课件染色体显带技术的优缺点染色体显带是细胞遗传学分析技术中不可替代的根本方法。“金标准〞操作简便,经济可以提供核型的完整图像影响因素:染色体相似性很强,复杂畸变时;或畸变微小〔如缺失<5Mb),缺乏以引起图像明显变化时,结果分析困难。耗时〔培养需72小时〕且依赖于获得良好的分裂相,而有的标本中分裂指数低,或染色体形态学表型差。整理课件一、FISH原理〔一〕、几个概念杂交原位杂交荧光原位杂交依据DNA双链碱基互补、变性和复性原理,用碱基序列的单链核酸片段作为探针检测样本中是否存在与其互补的同源核酸序列,这一过程叫做杂交。原位杂交(insituhybridization)是用已标记的核酸探针与组织切片或细胞中的待测核酸中的互补序列杂交,从而对组织细胞中的核酸进行定性、定位和相对定量分析。整理课件原位杂交1〕同位素原位杂交(Isotopicinsituhybridization)——70年代2〕非同位素原位杂交(Non-isotopicinsituhybridization)——80年代中后期〔1〕免疫酶联〔2〕荧光原位杂交〔Fluorescenceinsituhybridization,FISH)**同位素原位杂交的缺乏:1〕不稳定;2〕高背景;3〕曝光时间长;4〕结果统计学处理繁琐;5〕同位素的使用和处理整理课件荧光原位杂交〔FISH〕FISH技术是常规染色体分析的辅助手段。它是用荧光素标记特异探针,与染色体做杂交后,根据特异的荧光信号来判断结果。它可用于标记染色体的识别、特异融合基因的检测,并可广泛用于肿瘤的诊断分型,新基因定位,用全染色体涂抹探针识别复杂的染色体结构异常等。整理课件原理:通过观察荧光信号在染色体上的位置来反映相应基因的情况。整理课件整理课件二、FISH的优点:,探针标记后稳定,一次标记后可使用二年。,能迅速得到结果。,可同时几种不同探针,显示DNA片段及基因之间的相对位置与方向,空间定位精确;可以检测隐匿或微小的染色体畸变以及复杂核型。,而且还可用于静止期细胞的染色体数量及基因改变的研究。整理课件三、FISH探针用生物素或地高辛标记称为间接标记。杂交后需要通过免疫荧光抗体检测方能看到荧光信号。优点:在信号较弱或较小时可经抗原抗体反响扩大缺点步骤较多,操作麻烦。〔一〕、直接标记和间接标记整理课件直接用荧光素标记DNA的方法称为直接标记。优点:由于直接标记的探针杂交后可马上观察到荧光信号,省去了烦琐的免疫荧光反响。由于近年来荧光素的亮度和抗淬灭性的不断改进和提高,直接标记的荧光探针应用越来越多。整理课件