文档介绍：免疫荧光技术的原理、分类与应用2019/1/14免疫荧光技术基本原理免疫荧光技术是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪的精确性相结合的一项技术以荧光素作为标记物,与已知的抗体或抗原结合、但不影响其免疫学特性。然后将荧光素标记的抗体作为标准试剂,用于检测和鉴定未知的抗原在荧光显微镜下,可以直接观察呈现特异性荧光的抗原抗体复合物及其存在的部位。在实际工作中,由于荧光素标记抗体检查抗原的方法较为常用,所以一般通称为荧光抗体技术荧光的产生物质吸收外界能量进入激发状态,再回到稳定基态时,多余的能量会以电磁辐射的形式释放,即发出荧光,这类物质被称为荧光素。由光激发所引起的荧光,为光致荧光——荧光免疫技术由化学反应引起的荧光,为化学荧光——化学荧光技术荧光素的荧光特性停止供能,荧光现象随即终止对光的吸收和荧光的发射具有高度的选择性发射光的波长>入射光波长荧光效率:发射荧光的光量子数荧光效率=吸收光的光量子数荧光淬灭现象:荧光素的辐射能力减弱合适荧光素的选择具有与蛋白质形成共价键的化学基团荧光效率高,标记后下降不明显荧光与背景的色泽对比鲜明标记后能保持生物学活性和免疫活性标记方法简单、快速、安全无毒免疫荧光技术的主要优缺点优点:特异性强、敏感性高、速度快缺点:存在非特异性染色,结果判定的客观性不足,技术程序也较复杂根据实验方法分类直接法间接法补体法其他直接法将荧光标记的特异性抗体(抗原)直接加在抗原(抗体)上,经一定的温度和时间染色,水洗-干燥-封片-镜检操作简便、特异性高、非特异性染色少敏感性低抗原标记抗体荧光间接法先用已知未标记的特异抗体(一抗)与抗原反应,再用标记的抗体(二抗)与其反应,形成抗原-抗体-抗体复合物,水洗-干燥-封镜-镜检未知抗原未标记抗体标记抗体荧光补体法利用补体反应,通过形成抗原-抗体-补体复合物发射荧光补体标记抗补体抗体