文档介绍：生产用动物细胞及细胞培养工程生产用动物细胞鸡胚细胞,猴肾细胞WI-38,MRC-5二倍体细胞CHO、BHK、Vero转化细胞CHO-dhfr/EPO、BHK/IL-2重组细胞?原代细胞时期?二倍体细胞时期?连续细胞系时期?融合和重组细胞时期生产用动物细胞历史发展常见生产用细胞系Industrial cell linesCHO ---- tPA, EPO, Antibodies, Factor VIIIBHK---- CD molecules, Factor VIIIHuman 293 cells, PER C6, Mouse C127 ---- Protein C, viral vectors for gene therapyHybridoma, myelomas, SPO, NSO ---- AntibodiesVero---- viral inesNormal diploid cellsMRC-5, WI-38---- human ines细胞培养工程Cell Culture Engineering?按生产工艺大量培养,应用生产用动物细胞表达生产制备特定生物制剂的过程。FlaskSpinnerBio reactor (Bench scale)Bio Reactor (Plant)SubcultureProduction culture ExpansionWCBMCB1mL →100mL → 1L → 1Lx3 → 12L → 100L → 300L → 2KL→ 10KLCell Culture Process生产用动物细胞库生产用动物细胞库构成?原始细胞库(primary seed bank)?主细胞库(master cell bank, MCB) ?工作细胞库(working cell bank, WCB)目的:保证生产用细胞稳定、质量、生物安全性长期、稳定的生产出符合要求的高质量产品?原始细胞库为生产用动物细胞建立时较原始的细胞管,即融合细胞管、一次克隆及多为生产用动物细胞建立时较原始的细胞管,即融合细胞管、一次克隆及多次克隆的细胞管。次克隆的细胞管。?主细胞库/种子细胞库由原始细胞库中建株细胞扩大培养而冻存的细胞种子。由原始细胞库中建株细胞扩大培养而冻存的细胞种子。无无细菌、真菌、支原体及病毒细菌、真菌、支原体及病毒外源因子污染外源因子污染单一来源的单一来源的均质细胞均质细胞群体倍增水平尽可能低群体倍增水平尽可能低?生产细胞库/工作细胞库经检定合格后的细胞按生产条件大量培养、冻存的细胞管,是提供生产用细经检定合格后的细胞按生产条件大量培养、冻存的细胞管,是提供生产用细胞的唯一来源。胞的唯一来源。无菌性和无细胞交叉污染的检查无菌性和无细胞交叉污染的检查每次生产时取出复苏、扩增,每次生产时取出复苏、扩增,不再回冻不再回冻确定其确定其最高使用的传代次数最高使用的传代次数新细胞系新细胞系原始细胞库原始细胞库(2~5(2~5安安瓿瓿))扩大扩大主细胞库主细胞库(10~20(10~20安安瓿瓿))质控质控工作细胞库工作细胞库(40~100(40~100安安瓿瓿))扩大培养扩大培养质控质控终止培养终止培养扩大一个安瓿扩大一个安瓿扩大一个安瓿扩大一个安瓿检疫实验室检疫实验室培养方案培养方案生产用动物细胞的三级细胞库系统冻存记录