精品课件 鸡血细胞的体外融合.ppt

文档介绍：鸡血细胞的体外融合
动物细胞融合是细胞工程技术的重要手段之一,是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤的重要手段。
细胞生物学实验课件
实验目的
了解聚乙二醇(PEG)诱导体外细胞融合的基本原理。
通过PEG诱导鸡血细胞之间的融合实验,初步掌握细胞融合的基本方法。
实验原理
细胞融合又称体细胞杂交,是指用人工方法使两个或两个以上的体细胞融合成异核体细胞,随后,异核体同步进入有丝分裂,核膜崩溃,来自两个亲本细胞的基因组合在一起形成只含有一个细胞核的杂种细胞。
实验原理
依据融合过程采用的助融剂不同,细胞融合可分为:
病毒诱导的细胞融合,如仙台病毒(HVJ);
化学因子诱导的细胞融合,如聚乙二醇(PEG);
电场诱导的细胞融合;
激光诱导的细胞融合
实验原理
PEG是乙二醇的多聚化合物,可改变各类细胞的膜结构,使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组,诱导产生细胞融合。
商品PEG存在一系列不同分子质量的多聚体,一般应用PEG4000~6000的溶液,能够产生高频率的细胞融合。
实验仪器、用具
注射器
滴管
烧杯
容量瓶
凹面载玻片
盖玻片
离心机
水浴锅
显微镜
细胞计数板
酒精灯
试剂
Hanks原液(10×)
NaCl2
Na2HPO4·12H2O
KCl
KH2PO4
MgSO4·7H2O
葡萄糖
CaCl2
试剂
Hanks原液(10×)
,溶于30~50ml蒸馏水中
取1000mL的烧杯及容量瓶各1个,先放重蒸水800mL于烧杯中,然后按上页表顺序逐一溶解药品。直到葡萄糖完全溶解后,再将已溶解的CaCl2溶液加入,最后加水定容至1000mL
试剂
Hanks液
Hanks原液 100mL
重蒸水 896mL
%酚红 4mL
配好的Hanks液,分装包扎好贴上标签,经过灭菌后,4℃保存。
试剂
生理盐水
50%(m/V)PEG溶液
取50g PEG4000放入100mL瓶中,高压灭菌20min
让PEG冷却到50~60℃,勿让其凝固
加入50mL预热至50 ℃的Hanks液,混匀,至37 ℃保温备用。
詹纳斯绿染液