清洗液（酸液）的配方.doc

文档介绍：清洗液(酸液)的配方:
弱
次强
强
***盐(g)
100
120
63
浓硫酸(ml)
100
200
1000
蒸馏水(ml)
100
1000
200
较常用的为次强酸,新配制呈红色,经多次使用或遇有机溶剂呈绿色,表示清洁液已失效,需要配。
塑料及橡胶制品的处理:
先煮沸5min以上
用自来水清洗12遍以上
用双蒸水荡洗3遍以上
烘干
与玻璃器皿一起灭菌
96孔板清洗:
泡酸24-48hr(尽量没在酸液中)
捞出,用自来水冲洗12遍(注意冲洗每个孔)
双蒸水荡洗3遍
低温烘干(50摄氏度以下,且板要倒扣)
将板及盖照紫外3h
放置无菌室备用
另法:泡酸缸1h,自来水冲20遍,双蒸水冲10变,与pe手套\保鲜膜\皮筋一起照紫外一晚上,包装待用.
培养基配制:
成分(DMEM):培养基干粉(1包/升),碳酸氢钠(据培养基袋口的说明加,经验值2g/l),青霉素((10万u)/l),链霉素((10万u)/l)
配成溶液后过滤除菌,用前加入10%血清
注意:
所用双蒸水需要新鲜烧的,因为放置过久的双蒸水PH值变化
先溶解碳酸氢钠,再溶解双抗,最后加入培养基干粉
,在滤膜上方可放置一张滤纸进行粗滤,使用前先灭菌处理
小牛血清在开封之前需经过灭活,156摄氏度水浴30min,由于血清本来就是无菌的,所以无需过虑除菌(所剩的血清都已经灭活了,后购买的需先灭活再用)
消化液配制:
成分:,,100mlPBS;
先把EDTA溶于100ml的PBS中,再加入胰蛋白酶,定容到100ml;
注意:
先加热溶解EDTA
再加入胰蛋白酶,混匀

冻存液配制:
%的基础培养基(不含血清),20%的血清,10%的DMSO
%的培养液就加血清和10%DMSO,现配现用,加入细胞沉淀中
(2ml),一般最多只能加入1ml的细胞悬液,这样有利于复苏的存活率,然后逐步降温,步骤为:

2.-20摄氏度放置1hr
3.-70摄氏度放置3hr以上(或过夜)
(放置在事先作好的纱布袋中,并做好标记,包括冻存细胞的名称、冻存时间和数量)
注:液氮罐须定期检查(每半个月或1个月检查1次),若液氮高度低于罐高的1/3,须及时补充液氮,并做好记录,以便下次估计充氮时间。
MTT溶液配制(四***偶氮唑盐)
浓度5mg/ml,将称好的MTT加入PBS溶液,,4 摄氏度保存,由于MTT见光氧化,故在瓶外包纸避光保存。
PBS溶液配制:
NaCl 8g
KCl
Na2HPO4 ( )
KH2PO4
双蒸水定容到1L,-
(杨艳丽:
NaCl 8g
KCl

KH2PO4
双蒸水先抽滤再灭菌)
洗瓶:
烘干(如果是干的可以免去烘干这一步)
泡酸24hr以上
酸缸中拿出清水冲洗,直