文档介绍：壳聚糖固定化酶的研究
固化酶一种有远大前景的技术
学生:胡唐锦
指导老师:彭勇
Life Science College
提纲
(3p)
(4p)
3方法(4p)
(12p)
(1p)
Life Science College
纤维素固定化酶是许多轻工业生产中重要的酶试剂,当今全球面临能源供应危机,纤维素酶作为优良的生物催化剂,催化产生酒精的反应,一直引人注目,但一直受限于固定化成本高,经济上不可行的限制,一直未能大规模制备纤维素固定化酶。
Life Science College
?
酶的稳定性较差:高温、强酸、强碱和重金属离子因素影响下,都容易失活。
酶的一次性使用:难于回收利用不仅使生产成本提高,而且难于连续化生产。
酶与产物的分离纯化较困难:酶反应后成为杂质与产物混在一起,难以分离纯化产物
固定化酶
水溶性酶
水不溶性载体
制备
定义:在一定空间内呈闭锁状态的酶,能连续地进行反应,
反应后的酶可以回收重复利用。
(水不溶性酶)
Life Science College
深圳大学实验是自产的纤维素酶
壳聚糖粉末(脱乙酰程度≥ 80%)
交联法(戊二醛为交联剂)
水溶性酶
水不溶性载体
制备
壳聚糖:是一种相容性好,易降解,无毒,易得的天然功能高分子生物材料,易于制成粉,膜,多孔微珠,纤维,凝胶,,壳聚糖在固定化酶并保持其活性方面有独特的优点.
交联法:借助双功能试剂使酶分子之间发生交联作用,制成网状结构的固定化戊二醛:它的两个醛基都可以与酶或蛋白质的游离氨基形成 shiff,而交联成固定化酶
Life Science College
*
*
*
Life Science College
固定化纤维素酶的制备
①制备胶液
②制备凝结液体
③制备的壳聚糖微球
戊二醛交联
游离的纤维素酶液
+
⑤固定化纤维素酶
④壳聚糖载体的制备
Life Science College
固定化纤维素酶的制备分5个步骤
①给酶量的影响
②戊二醛浓度的影响
取7个50 mL小烧杯分别按的称取同一批次、 g,分别按1%,2%,3%,4%,5%,6%,7%,8%的戊二醛溶液进行交联。恒定其它条件分别于500nm波长下测定吸光度值。
取7个50 mL小烧杯分别称取同一批次、 g,分别按  mL,1 mL, mL,2 mL, mL,3 mL, mL的给酶量加入纤维素酶酶液,恒定其它条件, 分别于500nm波长下测定吸光度值。
固定化纤维素酶的单因素影响
Life Science College
固定化前后酶学性质的比较
用6组平行对照组,分别测定固定化酶和固定化前酶液在最适宜条件下的酶活力. 利用式子酶活力回收率(%)=固定化酶活力/固定化前酶活力。计算固定化酶的回收率
①固定化酶和游离酶最适反应温度
②固定化酶和游离酶最适反应pH
③固定化酶的回收率
④固定化酶的Vmax和Km值
将底物(CMC-Na)含量分别调到: mg, mg, mg, mg, mg, mg, mg,按照酶活力测定方法,,50℃下酶促反应10min,测定还原糖以计算酶反应的初速度[15]。以底物浓度的倒数(1/S)为横坐标,酶反应初速度的倒数(l/V)为纵坐标,作Lineweaver一Burk双倒数图。
以CMC-Na为底物,分别按固定化酶和游离酶的酶活力测定的方法,恒定其它条件,分别按照表5的温度即分别在25℃,30℃,35℃,40℃,45℃,50℃,55℃,60℃下反应30min后, 别测定其固定化酶的酶活力,以温度为横坐标,以相对酶活力为纵坐标作图,以酶活最高者为100%。
以CMC-Na为底物,分别按固定化酶和游离酶的酶活力测定的方法,恒定其它条件,,,,,,pH6,,,测定在不同反应pH时的酶活力,以pH值为横坐标,以相对酶活力为纵坐标作图,以酶活最高者为100%。
Life Science College
葡萄糖标准曲线的绘制
纤维素酶活力测定
酶活力的计算
Life Scienc