文档介绍：龙胆泻肝丸微生物限度检查方法验证论文
【摘要】目的:建立一种龙胆泻肝丸微生物限度检查方法。方法:采用药典规定的常规法和稀释法,通过验证确认所采用的方法是否适合于*该药品的细菌、霉菌和酵母菌、控制菌的检查。结果:细菌、霉菌和酵母菌方法验证中回收率在70%以上;控制菌方法验证中阳性对照菌检出,阴性对照菌未检出。结论:龙胆泻肝丸微生物限度检查法的细菌、霉菌和酵母菌数可以采用常规法或稀释法进行检查,控制菌检查可以采用常规法检查。
【关键词】微生物限度; 验证
当建立药品的微生物限度检查时,应进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证,以确认所采用的方法适合于该药品的细菌、霉菌及酵母菌的测定。验证试验可与供试品的细菌、霉菌及酵母菌计数同时进行。
1 实验材料
培养基
营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、胆盐乳糖发酵培养基、营养肉汤培养基、改良马丁液体培养基、改良马丁琼脂培养基、MUG培养基、靛基质试液。
菌种
(B)44102、(B)26003、(B)63501、(F)98001、(F)98003。
供试品
龙胆泻肝丸。
2 菌液的制备
大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液制备
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的营养琼脂斜面培养物接种于10ml营养肉汤培养基中,35~37℃培养18~24小时;%无菌***化钠溶液9ml,~100cfu的菌悬液。
白色念珠菌菌液制备
取白色念珠菌的改良马丁琼脂斜面培养物接种于10ml改良马丁培养基中,23~28℃培养24~48小时;%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-6或10-7,制成每1ml含菌数50~100cfu的菌悬液。
黑曲霉菌液制备
取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基中,23~28℃培养5~7天,加入3~%无菌***化钠溶液,.%无菌***化钠溶液9ml,采用10倍递增稀释法,稀释至10-4~10-6,制成每1ml含孢子数50~100cfu的孢子悬液。
3 供试液的制备
取供试品10g,***化钠蛋白胨缓冲液至100ml,用匀浆仪混匀,作为1:10供试液。
4 回收率测定
细菌回收率测定
试验组
(1)常规法:取1:10供试液1ml、菌液(10-6约50~100cfu)1ml,分别同时注入于平皿中,做10个平皿;立即倾注营养琼脂培养基,待凝固后,置30~35℃培养48小时,逐日观察结果。(2)稀释法:取1:10供试液1ml等量分注入于5个平皿中,每个平皿加试验菌(10-6约50~100cfu)1ml,立即倾注营养琼脂培养基,待凝固后,置30~35℃培养48小时,逐日观察结果。
菌液组取上述试验菌液,测定每一菌株所加的试验菌菌数。采取平皿法,取试验用的菌液(10-6约50~100cfu)1ml,分别注入平皿中,立刻倾注培养基,每株试验菌平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌落数。
供试品对照组(1)常规法:取1:10供试液1ml注入于平皿中,做2个平皿;立即倾注