文档介绍：菌种传代与保藏
菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料.
微生物具有生命活力,在传代过程中易发生变异甚至死亡,因此菌种保藏是一项重要的基础工作,是微生物学基础工作的一项重要内容,也是药品微生物工作中的一项常用技术。
工业微生物菌种保藏,是要使菌种生产能力和与生产工艺相适应的优良性状保持稳定,当然做不到绝对不变,只是力求把这种衰退现象推迟减缓到最低限度。
菌种菌种保藏
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在作低温保藏时,注意尽量不损伤细胞。在缓慢冷冻时,胞外基质一般较快结冰而形成冰晶使基质浓度增高,造成细胞水分外渗而大量脱水,可能使细胞死亡。如快速降温,胞内也很快形成冰晶,胞内外渗透压基本平衡,同时胞内冰晶较小,对细胞及原生质膜的损伤也较小,菌株不易死亡,影响也较小。
与低温相关的保藏方法,如冷冻干燥法、超低温保藏法等,都是利用低温条件下细胞与环境的特殊平衡原理而设计的。
低温定期移植法:
把培养好的斜面菌种放在低温干燥处保存,定期移植,一般3~6个月移植一次(视菌种特征而定)。也可以用穿刺培养,定期移植法保藏细菌,其效果也较好。
%~%的琼脂培养基装试管灭菌后直立冷凝后,用接种针尖挑取少量菌体,垂直刺入琼脂培养基中心,放在适当温度下培养,待菌长好后即可放低温保存,此法较斜面保存有利,大肠杆菌可保藏2年以上不发生明显变异。
甘油管保藏法:是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。其方法是,将40%的甘油高压蒸汽灭菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108~1010/ml)。取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀,使甘油浓度约为20%,于-20℃下冻存。