文档介绍：革兰氏染色法的原理及其练习
摘要:革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征,所以学习微生物学,进行革兰氏染色实验是很重要的。为保证染色结果的正确性,采用规范的的染色操作方法是十分必要。本实验主要对大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(ocus aureus Rosenbach)、枯草杆菌(Bacillus subtilis)进行革兰氏染色,观察它们的染色特征,辨别是革兰氏阴性还是阳性,从而掌握其染色方法。染色方法与过程很清晰,但实验结果中金黄色葡萄球菌( Rosenbach)多组呈现假阴性。本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染色方法及原理,但要想做出很好的染色得多加练习。本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。
关键词:革兰氏染色大肠杆菌() 金黄色葡萄球菌(S. aureus Rosenbach) 枯草杆菌()
引言
革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法,它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性(G+)和革兰氏阴性(G-)两种类型,这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。经过一定的染色过程后,革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高,脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高,乙醇处理时脂质溶解,蓝色被洗脱,复染后变为红色。革兰氏染色原理很简单,染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌,涂片不宜过厚,严格控制脱色时间。
大肠杆菌()是革兰氏阴性细菌,金黄色葡萄球菌(S. aureus Rosenbach)与枯草杆菌()都是革兰氏阳性细菌,染色后在显微镜下容易区别。同时它们的形态各异,可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。
本实验还涉及到高倍油镜的使用。使用油镜与用一般的镜头不同,具体使
用在实验方法中描述。
大肠杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,金黄色葡萄球菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,枯草杆菌16小时牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物。
溶液与试剂
无菌生理盐水,草酸铵结晶紫染液,卢戈氏碘液,95%乙醇,番红复染夜,香柏油,二甲苯
酒精灯,载玻片,显微镜,双层瓶,接种环,滴管等
方法
制片:取活跃生长期菌种按常规方法涂片(不要太厚)、干燥和固定。
(1)初染:滴加草酸结晶紫染液覆盖涂菌部位,染色2min,水洗至流出水无色。
(2)媒染:用卢戈氏染液冲去残留水迹,再用碘液覆盖1min,倾去碘液,水洗至流出水无色。
(3)脱色:将玻片上的水用吸水纸吸取,用滴管流加95%乙醇脱色(持续20秒),稍后立即洗去乙醇。
(4)复染:将玻片上的水用吸水纸吸去,用番红复染液染色2min,水洗,吸去残水烤干。