文档介绍：核酸提取经验及原理总结
主办单位:螺旋网
主讲人:wsuquan
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主要内容
一、核酸的发现、核酸的分类和功能、
核酸的理化性质
二、细胞裂解
三、核酸提取
四、核酸纯化
五、核酸检测
六、核酸除杂质
核酸的发现
核酸是1869年米
歇尔()在脓液
的白细胞中发现的,他
当时称之为核素。阿尔
特曼()于1889年
认识其酸性后,定名为核
酸。核酸分为核糖核酸
(RNA)和脱氧核糖核酸
(DNA)两大类。
脱氧核糖核酸(DNA)
DNA分子含有生物物种的所有遗传信息,分子量一般都很大(除RNA病毒外)。
DNA为双链分子,其中大多数是链状结构大分子,也有少部分呈环状结构。
核糖核酸(RNA)
RNA主要是负责DNA遗传信息的翻译和表达,分子量要比DNA小得多。RNA为单链分子, 根据RNA的功能,可以分为三种:
信使核糖核酸(mRNA);
转运核糖核酸(tRNA);
核蛋白体核糖核酸(rRNA)。
核酸的理化性质
RNA的纯品都呈白色粉末或结晶,DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。 DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物,一般都溶于水,不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂,它们的钠盐比游离核酸易溶于水,RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L,DNA钠盐在水中为10g/L,呈黏性胶体溶液。
细胞裂解
裂解原理
细胞的裂解方法
裂解方法的评价
样品与裂解液的比例
细胞裂解-裂解原理
经典的裂解液几乎都含有去污剂和盐。盐的作用,除了提供一个合适的裂解环境,还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏、维持核酸结构的稳定等。去污剂则是通过使蛋白质变性,破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质,从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶,利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段,促进核酸与蛋白质的分开,同时,也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。
细胞裂解-细胞的裂解方法
机械方法
化学试剂法
反复冻融法
酶解法
细胞裂解-裂解方法的评价
含蛋白酶的裂解方法,可以认为是抽提基因组 DNA 的首选。
高浓度蛋白质变性剂(如 GIT、GuHCl 等) 的裂解方法,是抽提 RNA 的首选。
含 CTAB 的裂解液,几乎成为富含多糖的样品,如细菌、植物的基因组 DNA 抽提的首选裂解方法。
SDS 碱裂解法是质粒抽提的首选裂解方法,具有快速、得率高、几乎无基因组 DNA 污染的特点。