文档介绍：沉降菌测试方法
1、把ф90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿包在报纸里,放入恒温烤箱中加热至180℃后,干烤2小时。
2、取X克培养基放入X克蒸馏水,放入高压消毒锅中加热溶化,冷至45℃时,在无菌操作要求下将培养基注入培养皿,每皿约15ml。
3、待琼脂凝固后,将培养基平皿倒置于33℃恒温培养箱中培养48小时,若培养基平皿上确无菌落生长,即可采样用。制备好培养皿宜在2—8℃环境中保存。
4、采样时,一般在100级层流罩中放置3个培养皿,在100000级,10000级按面积大小一般放2个培养皿。打开培养皿盖,,再将培养皿盖上后倒置于恒温培养箱33℃培养,时间不小于48小时,—。
5、将培养皿举起用肉眼直接计数,用记号笔点记然后用5—10倍放大镜检查是否遗漏,若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠,分辨时仍以2个或2个以上菌落计数,不要漏计培养皿边缘生长菌落,并注意细菌菌落与培养基沉淀物区别。
6、沉降菌测试前,被测洁净室已消毒。被测洁净室温湿度须达到规定要求,静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内,测试状态有静态和动态两种,测试状态选择须符合生产要求,并在报告中注明测试状态。
7、测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别工作服,静态测试时,室内测试人员不得多于2人。测试时间对单向流100级净化房间及层流工作台,测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始,对非单向流,100000级以上净化房间,测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
8、平均菌落数计算:M1+M2+M3
平均菌落数=
n—培养皿总数
M1—1号培养皿菌落数
M2—2号培养皿菌落数
Mn—n号培养皿菌落数
用平均菌落数判断洁净空气中微生物。洁净室内平均菌落数必须低于所选定的评定标准,(100级≤1个;10000级≤3个;100000级≤10个)。若某洁净室内平均菌落数超过标准,则必须对此区域先进行消毒,然后重新采样两次,测试结果均须合格。
人员进出洁净生产区的一般程序:
换
鞋
脱
外
套
穿工
洁作
净服
气或吹
闸空淋
室气室
洁净生产区
手消毒
洗手
进
单旁门
向通
出
人员进出无菌操作洁净生产区程序:
洗
脸
手
腕
手消毒
手消毒
穿无菌外衣
换无菌鞋
无洁
菌净
操生
作产
区
气气
闸吹
室淋
或室
空
穿无菌内衣
脱
内
衣
脱
外
套
换
鞋
进
出
无菌医疗器具洁净室环境要求及监测:
监测项目技术指标监测方法监测频次
100级 10000级 100000级 300000级
温度(℃) 18℃—28℃ 1次/班
相对湿度% 45~65 1次/班
水平层流
风速m/s ≥ —————— JC
垂直层流 1次/月
≥
换气次数——≥20 ≥15 ≥12 1次/月
静压差Pa 不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间≥5
洁净室与室外大气≥10 1次/月
沉降菌数≤1 ≤3 ≤10 ≤15 GB/T16294-1996 1次/周
附录C(资料性附录)洁净室(区)沉降菌技术要求 
洁净室(区)沉降菌技术要求 
洁净度
级别
澳大利亚TGA
CGMP
(2002年8月16日)
欧盟EU CGMP
附录l 
(2008年2月)
美国FDA
CGMP 
(2004年9月)
药品生产质量管理规范
(1998修订)
φ90mm 
CFU/4ha
φ90mm 
CFU/4ha
φ90mm 
CFU/4ha
沉降菌/皿,
100
A级
<1
A级
<1
<1
≤1
-
B级
≤5
B级
≤5
≤3(1000级)
-
10000
C级
≤50
C级
≤50
≤5
≤3
100000
D级
≤100
D级
≤100
≤50
≤10
为培养皿暴露时间不超过4h,以平均菌落数表示。
无菌检查法试验步骤
无菌检查在洁净度100级单向流空气区域内进行,其全过程应严格遵守无菌操作,防止微生物污染。
1、器具灭菌:培养皿若干个(报纸所好)、试管、剪刀、镊子等装入盒中置电热干燥箱内180℃,2小时。
2、硫乙醇酸盐流体培养基(细菌),根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水,煮沸,摇匀,分装至适宜的容器中,瓶塞封口,灭菌。硫乙醇酸盐流体培养基置33℃培养48小时,应无菌生长。
改良马丁培养基(真菌),根据试验实际用量取若干培养基和蒸馏水,煮沸,摇匀,分装,灭菌。改良马丁培养基置24℃培养72小时,应无菌生长。
营养琼脂