质粒DNA提取.ppt

文档介绍：小规模制备质粒DNA的技术分析
一、实验目的
(1) 学习小规模制备质粒DNA的技术。
二、实验原理
质粒(Plasmid) :
独立于染色体外的,能自主复制且稳定遗传的遗传因子。是一种环状的双链DNA分子。
存在于细菌、放线菌、真菌以及一些动植物细胞中,在细菌细胞中最多。
细菌质粒:
细菌质粒是用的最多的质粒类群,其大小从1Kb-200Kb,它们复制时利用宿主细胞复制自身基因组DNA的同一组酶系。
严谨型:这些质粒的复制是在寄主细胞严格控制之下的,与寄主细胞的复制偶联同步。所以,往往在一个细胞中只有一份或几份拷贝;
松驰型:这些质粒的复制是在寄主细胞的松弛控制之下的,每个细胞中含有10-200份拷贝,如果用一定的药物处理抑制寄主蛋白质的合成才会使质粒拷贝数增至几千份。如较早的质粒pBR322即属于松弛型质粒,要经过氯霉素处理才能达到更高拷贝数。
质粒类型:
载体(Vector):
用于携带重组DNA,并且能够使外源DNA一起复制与表达的质粒(运载工具)。
具备的条件:
易于鉴定;
在受体细胞中可以独立复制;
易于筛选;
易于导入受体细胞。
抗性基因(Antibiotic resistance gene,such as Ampicillin resistance gene, Kanamycine resistance gene)
启始复制子(ori, Origin of replication);
多克隆位点(MSC, Multiple cloning site or polylinker);
标记基因(Marker gene, such as LacZ gene)。
载体的结构:
Insert
EcoRI
XhoI


质粒的特性:共价、闭合、环状的小分子量DNA
要去除的物质:
蛋白
基因组DNA
脂类及小分子杂质
RNA