文档介绍：原核生物***化酶是作为限制与修饰系统中的一员,
用于保护宿主 DNA 不被相应的限制酶所切割。
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一、DNA***化酶
***化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序。***化酶使识别顺序中的某个碱基发生***化,保护DNA不被限制性内切酶切开。
真核生物中目前只发现5-***胞嘧啶(M5C)。M5C占整个胞嘧啶中的2~7%(果蝇和某些昆虫例外)。M5C大多以M5CpG的形式存在,不同物种或同一物种的不同组织中,M5C出现的频率也不尽相同。
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将限制性内切酶和***化酶同时作用,可使有几种可能识别顺序的限制性内切酶只对其中一种识别顺序有效。
例如限制性内切酶AvaⅠ的识别顺序是:
5’……CPyCGPuG……3’
3’……GPuGCPyC……5’
Py可以是任何一种嘧啶,pu可以是任何一种嘌呤。因此可以有4种识别顺序。如果同时使用***化酶TaqⅠ和***化酶HpaⅡ,则AvaⅠ的识别顺序将只是5’……CCCGAG……3’。
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如果有一个DN***段,有AvaⅠ的3个识别顺序,当用AvaⅠ处理后可得4个片段。可是,如果先用TaqⅠ***化酶和HpaⅡ***化酶使DNA顺序中的有些碱基***化,然后再用AvaⅠ去切,结果只有1个识别顺序可被AvaⅠ作用,只产生2个DN***段。
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二、***化酶的种类
在真核和原核生物中存在大量的***化酶,
***化酶
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Dam***化酶
DNA Adenine methylase
GATC
腺嘌呤N6位置
引入***
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PvuII BamHI BclI BglII XhoII
MboI Sau3AI
识别位点中含GATC序列
ClaI(1/4) XbaI (1/16) TaqI (1/16)
MboII (1/16) HphI(1/16)
部分识别序列含GATC序列
4个ClaI位点(ATCGATN)中有一个该序列
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有些限制酶对Dam***化敏感
不能切割相应的序列
如:BclI, ClaI, MboI, XbaI 等这;***化敏感的限制性内切酶.
不敏感的有
BamHI, Sau3AI, BglII, PvuI等.
MboⅠ和 Sau3AⅠ识别和切割位点相同,但其差异就在于前者对***化敏感。
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一般哺乳动物DNA 不会在A-N6上***化
当需要在敏感位点上完全切割DNA时,必须从dam-
Dcm***化酶
DNA cytsine methylase
TGG序列
在第二个C上C5位置上引入***