文档介绍：第二节***化酶 Methylase Methylation methyltransferase 原核生物***化酶是作为限制与修饰系统中的一员, 用于保护宿主 DNA 不被相应的限制酶所切割。一、 DNA ***化酶***化酶同限制性内切酶具有完全相同的识别顺序。***化酶使识别顺序中的某个碱基发生***化,保护 DNA 不被限制性内切酶切开。真核生物中目前只发现 5-***胞嘧啶( M5C )。 M5C 占整个胞嘧啶中的 2~7% (果蝇和某些昆虫例外)。 M5C 大多以 M5CpG 的形式存在,不同物种或同一物种的不同组织中, M5C 出现的频率也不尽相同。将限制性内切酶和***化酶同时作用,可使有几种可能识别顺序的限制性内切酶只对其中一种识别顺序有效。例如限制性内切酶 Ava Ⅰ的识别顺序是: 5 ’…… CPyCGPuG …… 3’3 ’…… GPuGCPyC …… 5’ Py 可以是任何一种嘧啶, pu可以是任何一种嘌呤。因此可以有 4种识别顺序。如果同时使用***化酶 Taq Ⅰ和***化酶 Hpa Ⅱ,则 Ava Ⅰ的识别顺序将只是 5 ’…… CCCGAG …… 3’。如果有一个 DNA 片段,有 Ava Ⅰ的3个识别顺序,当用 Ava Ⅰ处理后可得 4个片段。可是,如果先用 Taq Ⅰ***化酶和 Hpa Ⅱ***化酶使 DNA 顺序中的有些碱基***化,然后再用 Ava Ⅰ去切,结果只有 1个识别顺序可被 Ava Ⅰ作用,只产生 2个 DNA 片段。二、***化酶的种类在真核和原核生物中存在大量的***化酶, 在 中大多数都有三个位点特异性的 DNA ***化酶 1. Dam ***化酶 DNA Adenine methylase GATC 腺嘌呤 N6 位置引入***? Pvu II Bam HI Bcl I Bgl II Xho II Mbo ISau 3AI 识别位点中含 GATC 序列? Cla I(1/4) Xba I (1/16) Taq I (1/16) Mbo II (1/16) Hph I(1/16) 部分部分识别识别序列含序列含 GATC GATC 序列序列 4个 Cla I位点( ATC GAT N) 中有一个该序列有些限制酶对 Dam ***化敏感不能切割相不能切割相应应的序列的序列如如:Bcl :Bcl I I, , Cla Cla I I, , Mbo Mbo I I, , Xba Xba I I等等这这; ;***化***化敏感的限制性内切敏感的限制性内切酶酶. .不敏感的有 Bam HI , Sau 3AI, Bgl II, Pvu I等. Mbo Ⅰ和 Sau 3A Ⅰ识别和切割位点相同,但其差异就在于前者对***化敏感。一般哺乳动物 DNA 不会在 A-N 6上***化当需要在敏感位点上完全切割当需要在敏感位点上完全切割 DNA DNA 时时, , 必必须须从从dam dam - - 中提取中提取 DNA DNA