文档介绍：实验八:不连续聚丙烯酰***凝胶电泳
贾跃腾罗世翔
一、不连续聚丙烯酰***凝胶电泳
实验操作及注意事项(P138)
实验分组(每人做一管,每组配一份胶)
 认清试剂(试剂和吸管对号、量器的使用)
 
封管
 
分离胶配制与灌胶(浓度为6%,化学聚合,A1C2H2G5,每组总体积为10ml,灌胶高度为7-8cm)
封正丁醇3mm(手法、高度、15min左右出现折光线时可进行下一步操作)
分离胶的配制
注意事项:
1、封管要严,防止漏液。
2、固定玻璃管要竖直,防止夹碎。
3、每组配一份胶,试剂与移液管对号,准确加量。
4、配胶后立即灌胶(用滴管灌胶,用后立即清洗)
5、正丁醇沿管壁缓缓加入
浓缩胶配制(浓度为3%,光聚合,B1D2E1F4,每组总体积为8ml)
 
倒掉正丁醇
灌浓缩胶(,上面留1cm空隙加样)
 
封正丁醇3mm(观察界面,10分钟左右出现折光线时可倒去正丁醇)
浓缩胶的配制
注意事项:
1、倒掉正丁醇,用滤纸吸干再灌浓缩胶。
2、配胶后立即灌胶(用滴管)
3、灌胶后立即清洗滴管,防止胶凝固于管中。
4、撕掉封口膜,用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上(竖直,防漏)
5、加电极缓冲液(注意液面)
安装电泳槽(结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡)加buffer(没过上下管口) 样品处理并加样(20ul) 电泳(6mA/管,距底1cm时停止)剥胶固定(时间5min)染色(时间2min)漂洗脱色至背景透亮
安装、加样、电泳
二、电泳基本原理及相关知识
电泳的概念
带电粒子(胶体颗粒、离子等)在电场的作用下在特定的介质中向与其电荷性质相反的电极方向定向泳动的现象。
广泛应用于生物大分子的分离和鉴定.