文档介绍：色谱分析
应用化学系
第一节高效液相色谱的色谱柱
第二节高效液相色谱的流动相
第三节超高效液相色谱和制备色谱
第八章液相色谱的色谱柱和流动相
本章重点难点
重点:
1、掌握液相色谱填料的基质;
2、液相色谱固定相主要类别和制备方法;
3、高效液相色谱流动相的选择。
难点:
1、根据说明书和产品目录正确选择液相色谱柱;
2、流动相紫外截止波长的正确使用。
第一节高效液相色谱的色谱柱
一、HPLC柱填料
1、全多孔球形硅胶填料最为普遍
硅胶基质分为微孔(小于2nm),中孔(2-50nm),大孔(大于50nm)硅胶,多用中孔和大孔硅胶填料。
2、其它金属氧化物基质填料
TiO2、ZrO2、高分子聚合物等基质的填料,能够改善耐碱性和减弱硅羟基效应。
二、硅胶色谱柱填料的优势
硅胶有良好的机械强度;
硅胶的孔结构和比表面积容易控制;
硅胶填料具有比较好的化学稳定性和热稳定性;
硅胶表面具有丰富的硅羟基,可以进行化学键合修饰。
三、硅胶色谱柱填料的残余硅羟基效应
残余硅羟基效应导致碱性分析物严重拖尾,分离度低。
加入碱性流动相
添加剂抑制
四、反相色谱柱填料保留性能随温度的变化
色谱容量因子k是热力学参数,lnk与1/T在一定温度范围内呈线性关系。可以借助于该计算公式求焓变、熵变。
五、提高硅胶基质反相色谱填料的色谱性能
提纯硅胶,利用高纯(%)硅胶色谱填料;
对硅胶进行充分封端(尾);
利用空间位阻掩蔽残余硅羟基;
键合相分子中嵌入极性基团(***基、脲基、酰***基);
双齿键合相。
六、高效液相色谱键合固定相的类型
主要有四类:
硅-氧-碳键型固定相
硅-氮-碳键型固定相
硅-氧-硅-碳键型固定相
硅-碳键型固定相