文档介绍：复旦大学
博士学位论文
hCGβ-C3d3融合蛋白疫苗的体液免疫效应及其抗生育潜能
姓名:王秀丽
申请学位级别:博士
专业:妇产科学
指导教师:李大金
20040410
中文摘要疫化学染色法鉴定欠裼隒分子成功融合。随后,采用针对于的目的:构建带有鲎榘彼炕昵┑膆诤系鞍缀蚳蛋白的分泌型真核表达质粒,体外稳定表达与纯化具有生物学活性的籆融合蛋白和蛋白。通过融合分子佐剂,增强鞍卓乖诓煌品系小鼠的免疫原性,实现鞍滓呙绲腡型体液免疫优势效应,并增强个组氨酸纯化标签,将其构建入高效真核表达载体即得猦。将与谢蛉诤希⒐。脂质体法介导一—.、赴痬筛选抗药性克隆。放射免疫法检测抗性克隆无血清培液中泶锪浚琖鉴定所表达的重组蛋白,细胞免镍柱结合凝胶过滤层析纯化表达产物。分别用瓹诤系鞍住⒌ビ胔蛋白和鞍准佑酶ナ献艏撩庖呱诖菩訠痗和小鼠,共免疫两次,间隔堋测定血清中抗固宓味龋冉细髯榈拿庖咝Ч/∈笥谀┐蚊庖吆周处死,制备脾淋巴细胞悬液,逋饴龀迮嘌胞因子分泌水平。为检测瓹诤系鞍滓呙绲目股蹦埽裩分别与正常鼠血清、籆庖呤笱G濉庖呤笱G搴蚳/免疫鼠血清共培养一赴Х⒐夥ḿ觳馀嘌凹肮才嘌小时后培养鼠血清和疘免疫鼠血清,每天危天。旌笕∽庸剖重,计算每克体重的子宫湿重痝籆诤系鞍滓呙缈寡G逯泻蚳生物学活性的能力。方法:以带有信号肽的为模板,经从υ趆的氨基端加上蚿籬转染中国仓鼠卵巢珽检测培养上清中蚑型、一上清中孕酮的含量。此外,选用芰浯菩訠痗小鼠,皮下注射耐时分别腹腔内注射系列稀释的正常鼠血清、—免疫鼠血清、庖
小鼠,狢诤系鞍子盏疾筯固宓某鱿质奔涠济飨栽缬诘ビ性研究结果显示,.融合蛋白和疘抗血清均能明显抑制接头。放免检测结果显示,在赴剐钥寺∥扪G迮嘁褐锌杉觳獾絟的表达,其中表达的效率是载体的叮泶——谋泶锊镂琾猦一的表达产物有三种,大小分别为D岷夏汗瞬阄龃炕苫竦媒蛋白和鞍准佑酶ナ献艏撩庖咦椤痗小鼠的免疫结果显示,使拿庖咴栽銮苛叮珻淖艏聊芰κ歉ナ献艏恋初次免疫再次免疫/∈笏允境龅奶逡好庖叻从η慷人洳如/∈螅獵彩筯拿庖咴栽銮苛叮珻淖艏聊力是弗氏佐剂的倍醮蚊庖~倍俅蚊庖。细胞因子分析结果显分析,.融合蛋白免疫组为,显示拖赴蜃用飨杂攀票泶铮碳细胞分泌孕酮的作用,两组间无显著性差异。抗血清对稀释液和的/寡G逑∈鸵壕上灾种苃诱导的小鼠子宫增重,抗血清只能在南∈投认允疽种谱饔谩结论:。在赴锌沙晒竦—融合蛋白和鞍椎姆置谛浴⑽榷ū泶铩婧嗽靥宓谋达效率高于。镍柱结合凝胶过滤层析可纯化获得较高纯度的重组蛋白。在个体差异很大的不同品系小鼠,分子佐剂均可大幅增强茉幸呙—.菇ㄕ罚琱与连接子为稳定、。分析显示,高纯度的—融合蛋白和蛋白。无论是/∈蠡故荂/示,.,以一融合蛋白免疫组最明显。,比值而免疫组为,陀攀菩вΣ蝗鏷狢诤系鞍住?寡G逄纳镅Щ钚约负趺挥杏跋臁4涌寡G逶褐羖:膆狢寡G结果:酶切鉴定及测序结果显示:—一和中文摘要●
的免疫原性,使一融合蛋白呈现一个吞逡好庖哂攀菩вΑ6杂抗原而言,的佐剂能力强于弗氏佐剂。籆诤系鞍卓寡G关键词:篊肿幼艏粒罕茉幸呙纾禾逡好庖撸籘/嚎股蹦具有很强的中和镅Щ钚缘淖饔谩中文摘要
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言引使拿庖咴栽銮苛多倍,并实现了人绒毛膜促性腺激素怯商ヅ毯咸遄萄赴置诘囊恢痔堑鞍准に兀其主要的生理功能是延长黄体寿命,使之增大成为妊娠黄体,增加孕激素的分泌由于侨焉锲谠菔背鱿值囊恢痔匾煨约に兀泻蚳的生物学活性可以在不干扰其它生殖生物学功能的情况下中止妊娠,因此殉Q芯拷峁允荆琱避孕疫苗具有可喜的应用前景,但免疫效果个体之间差异较大,目前仅有%的避孕效果,距俅灿τ孟嗑嗌踉丁R虼耍教窒灾銮烤哂锌股饔玫奶逡好庖咝в和减弱个体之间的差异性,己成为现阶段茉幸呙绲难芯磕勘辍为了打破机体对飧鲂》肿幼陨砜乖拿庖吣褪埽酝蠖嗖捎冒缀类毒素或破伤风类毒素作为载体增强其免疫原性;但和却存在着载体介导的表位抑制效应。显著增强体液免疫效力的新型分子佐剂茉幸呙绲难芯刻峁┝艘桓鐾黄瓶凇T谝酝难芯恐校没蚬こ碳际我们成功构建了个拷贝肿拥恼婧吮泶镏柿瓹玫降娜诤系鞍拙ㄖな导染哂蠧肿咏岷匣钚裕簿哂乖钥凇T诩韧芯炕∩ü訠痗小鼠的基因免疫,显示分子佐剂呙绲拿庖咝вΥ拖赴庖呦騎型体液免疫偏倚【5牵琱呙绲姆⒄故艿以下因素的限制:第一,由于重组基因在宿主细胞中的表达量受限,极大地影响与茉幸呙缱非骉型体液免疫效应的目标不相适应