文档介绍：第三章:基因工程的工具酶
限制—修饰系统
限制:通过限制性核酸内切酶的作用,破坏入侵的外源DNA(如噬菌体DNA等),使得外源DNA对生物细胞的入侵受到限制;
修饰:生物细胞(如宿主)自身DNA分子通过***化酶的作用,在碱基特定位置上发生了***化,可免遭自身限制性内切酶的破坏。
用于核酸操作的工具酶
限制性核酸内切酶
DNA聚合酶
DNA连接酶
核酸修饰酶
核酸酶
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的发现及其生物功能
识别双链DNA分子中的特定序列,并切割DNA双链
主要存在于原核细菌中,帮助细菌限制外来DNA的入侵
细菌的限制与修饰作用
1968年,Smith等人首先从流感嗜血杆菌d株中分离出
HindⅡ和Hind Ⅲ
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的类型
主要特性 I 型 II 型 III 型
限制修饰
多功能
单功能
双功能
蛋白结构
异源三聚体
同源二聚体
异源二聚体
辅助因子
ATP Mg2+ SAM
ATP Mg2+ SAM
Mg2+
识别序列
TGAN8TGCT
旋转对称序列
6GTGC
CAGCAG
切割位点
距识别序列1kb处
识别序列内或附近
距识别序列下游
随机性切割
特异性切割
24-26bp处
限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶的命名
属名种名株名
H i n d Ⅲ H i n d Ⅱ
Haemophilus influenzae d 嗜血流感杆菌d株
同一菌株中所含的多个不同的限制性核酸内切酶
限制性核酸内切酶
II 型限制性核酸内切酶的基本特性
识别双链DNA分子中4 - 8对碱基的特定序列
大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧
识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构
5‘… G C T G A A T T C G A G … 3’
3‘… C G A C T T A A G C T C … 5’
EcoRⅠ的识别序列
EcoR Ⅰ的切割位点
限制性核酸内切酶的切割类型:
(1)两条链上的断裂位置是交错和对称围绕着一个对称轴排列,这种形式的断裂结果形成具有粘末端的DN***段;
(2)两条链上的断裂位置是处在一个对称轴的中心,这样形式的断裂是形成具有平末端的DN***段。