文档介绍：摘要含有非天然氨基酸的蛋白质�绶�牒笮奘蔚鞍字省⑿奘斡刑秸敕肿拥牡鞍�质等�腔���镅е兄匾5纳�砘钚苑肿印U庑┓肿幽岩酝ü��锉泶锢椿袢。�而必须使用化学方法来合成。半咣氨酸肽片段连接方法是目前应用于蛋白质化学全合成中的一种重要方法,该方法能够在温和的水溶液中高效地实现肽片段的连接,从而生成天然或者非天然的蛋白质。这种连接方法要求多肽的�吮匦胧前腚�氨酸,而半胱氨酸在蛋白质中的含量丰度仅为��%。此外,这种肽片段连接方法还要求参与偶联的另一段肽其�吮匦胧请牧蝓ィ��牧蝓ピ谌芤褐形榷ㄐ越喜睿�且不易用常规的��固相合成方法制备得到。因此,如何改进这种方法使其能够摆脱半胱氨酸和硫酯的限制,对于蛋白质的全合成具有极为重要的价值。在本论文中作者发展了在肽链�说谝桓鲺0返T�由鲜褂每赏讶サ嫩匣�修饰基团的远程肽片段连接方法,实现��嚯腃端硫酯与�硕嘀掷嘈桶被��在温和条件下的连接反应,扩充了连接位点的多样性,从而摆脱了传统半胱氨酸肽片段连接方法对�税腚装彼岬南拗埔约霸陔牧碞端氨基上使用易脱去的巯基修饰基团的方法对甘氨酸的限制。关键词:肽片段连接半胱氨酸硫酯远程肽片断连接巯基修饰基团
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第�挛南鬃凼�蛋白质是生物体内功能最重要的一类生物大分子,随着人类基因组序列测定工作的完成,将需要合成大量的多肽和蛋白质,特别是一些修饰的蛋白质,用于蛋白质的组学研究。传统的基因表达方法由于其多肽链必须经过核糖体的合成得到,因而无法进行翻译后的修饰⋯。而����热朔⒄沟娜斯け嗦敕翘烊话被��新遗传密码的手段【�俊F浞椒ǖ母拍钏淙皇�治��耍��窃诰咛迨迪稚鲜艿搅�蛋白表达效率以及可供选择的非天然氨基酸的限制,因而目前尚没有普遍意义。相比之下,蛋白质的化学合成,特别是��等人发展出来的自然化学连接方法����,����.�,完全依靠化学的从头合成手段,允许在蛋白质分子的特定位置引入非天然的结构,受到的限制较少,因而应用前景更为广泛���1疚慕�攵杂胱匀换�Я�酉喙氐囊韵履谌莸难芯拷�菇�薪樯埽��自然化学连接的机理:��宰匀换�Я�臃椒ǖ母慕���发展的各种方法在蛋白质合成中的应用。图��自然化学连接方法的示意图【������●�����������������
自然化学连接的概念��.�滔嗪铣傻哪芰τ刖窒���.�匀换�Я�臃椒ǖ钠鹪���自然化学连接反应的机理不能被完全而详细的阐明,但通常被认为是通过如下步骤进行的【�】��.�:固相多肽合成方法���—��������琒��按照目标分子的氨基酸序列将其在树脂上依次组装起来,方法成熟,操作简单,但其合成能力依赖于每步的合成效率。由于反应过程中生成的连接在树脂上的各种副产物的积累效应,会导致反应产物纯度不高,给目标分子的分离纯化带来一定的困难,因此即使高度优化的固相多肽合成方法也只局限于合成含约�.�个氨基酸的肽链【�俊���年,����仁紫确⑾謁����虲��在水相中生成二肽����的反应【�。��年,���、组将此反应发展成为一种有效且实用的蛋白质化学合成方法.���������】,该方法分别使用�撕虲端具有特定化学结构的非保护的多肽片断,通常在水溶液体系中进行化学选择性的连接反应,生成连接位点为天然肽键的蛋白质分子。当前,自然化学连接是合成多肽和蛋白质最有效的途径。使用该方法,��等人最近完成了����珽��甀�琀��蛋白酶等的化学合成,并初步证明了这些人工合成的蛋白质在功能上与天然蛋白质完全自然化学连接,是水相中的两段未保护的多肽片段进行化学选择性反应,生成以共价键相连的产物。�宋A蝓サ亩嚯钠�斡隢端为半胱氨酸残基的多肽片段反应,得到以半胱氨酸为连接位点的产物。虽然自然化学连