免疫荧光技术.ppt

文档介绍：免疫荧光技术
间接免疫荧光法测ANA
兰州大学基础医学院免疫研究所梁亚玲
实验原理
以小鼠肝细胞或某些培养细胞(如人喉癌上皮细胞HEP-2)作为抗原片,将病人血清加到抗原片上。
如果血清中含有ANA,就会与细胞核成分特异性结合。
加入荧光素标记的抗人IgG抗体,又可与ANA结合,在荧光显微镜下可见细胞核部位呈现荧光。
试剂与器材
抗原片(自行制备)、异硫***酸荧光素标记的抗人IgG抗体(购买)、、待测血清、阳性与阴性对照血清。
器材:荧光显微镜、孵箱、有盖湿盒(内铺浸湿海绵或纱布)、吸管、试管等。
实验步骤
(方法见实验指导),每张玻片轻印两处,分别用记号笔标记。
:10稀释,滴加于抗原片上,放湿盒内,37℃温浴30min。
3. 取出抗原片,用流水冲去未结合的血清,置PBS(1、2、3缸)中浸洗,每缸5min,吹干。
-抗人IgG抗体,置湿盒内,37 ℃孵育30min。幻灯片 7
,吹干。
,荧光显微镜检查。
结果观察
细胞核发黄绿色荧光为阳性染色细胞(本实验中为ANA阳性),不发荧光为阴性。
注意细胞核着染荧光的图像类型:均质型、周边型、斑点型、核仁型及混合型。
实验讨论
注意事项:抗原片应用前需吹干;待检血清应保证新鲜。
方法评价:间接免疫荧光技术是检测ANA最常用的方法。
由于鼠肝印片细胞分布布均匀,多有重叠,冲洗时易丢失。目前临床检测采用核大、有丝分裂旺盛、核内细胞器较明显的HEP-2细胞作为基质片。