文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
革兰阴性杆菌中整合子的研究
姓名:韩立中
申请学位级别:博士
专业:临床检验诊断学
指导教师:倪语星
20040401
革兰阴性杆菌中整合子的研究子,’能识别并俘获移动性基因盒。基因盒是整合子上所携带的基因片段,常携带耐药基因。整合子本身不能转移,但其携带的基因盒可以酶是革兰阴性杆菌对抗生素耐药的一个主要原因,目前已知多种等;一一—虸等其他築一内酰胺酶。研究革兰阴性杆菌中整合子的种类和分布。通过分析三个新发及多重耐药中所发挥的作用。在此基础海陨虾H鸾鹨皆杭斐龅多株携带整合子介导弧换虻耐碳俚グ型葱苑治觥试验菌株和实验方法碳俚グ鶵分离自瑞金医院灼伤科痰标本,该菌对亚胺培南耐药,用三相水解试验分析多重耐药临床菌株所产荒邗0访福长片段┰稣献拥目杀淝⒉庑蛞匀啡峡冢邗0访富蚴欠药基因的转移性。析多重耐药临床菌株所产荒邗0访福肞扩增细菌的耐药基因、占虾H鸾鹨皆汉蜕虾5诹嗣褚皆旱株革兰阴性杆菌,中文摘要研究背景整合子是一种基因片段,是具有位点特异性重组功能的基因决定转移到其他的整合子或细菌基因组的其他位点。整合子在细菌获得和转移耐药性的过程中发挥了重要的作用。革兰阴性杆菌产荒邗0内酰胺酶是由整合子介导的,其中包括—一一和菳群荒邗0访福牙一萩群荒邗0访福—一一、一、幂菵群荒邗0访截止年。但目前国内对整合子介导的耐药性尚缺乏系统的研究。实验目的现的整合子的结构,探讨整合子在其宿主菌荒邗0防嗫股啬鸵用┰鱿妇哪鸵┗颉⒂肞跎覆⒎中驼献印⒂为整合子介导,通过细菌质粒,染色体抽提和斑点杂交等手段研究耐碳俚グ鶵对所有受试抗生素耐药,用三相水解试验分用猂跎覆⒎中驼献印⒂贸て蜳扩增整合子的可变区并测序以确认邗0访富蚴欠裎U献咏榈迹ü哉献结构的分析研究细菌多重耐药的原因。猯、、、、、一一一、、一一一、—、—、.
调查—涂谝荒邗0访讣罢献拥姆植记榭觯⒎治稣子对细菌耐药表型的影响。对上海瑞金医院灼伤科检出的株携带碳俚グ鶵携带整合子介导的金属荒邗0访福粒,但对染色体的点杂交试验也是阴性结果,个整合子结构分别为—/型,在两家医院的菌株中也未检测到新的携带基因的菌基因,分析发现这些铜绿假单胞菌具有同源性。芯糠⑾终献庸惴捍嬖谟诟锢家跣愿司校献映跎秆粜甊ǚ治晷献咏榈糣虴耐碳俚铜绿假单胞菌;多重耐药性;金属荒邗0访福怀闫譈一内酰虴耐碳俚グ耐葱越械鞑椋粤私飧镁暝灼伤科的流行情况。实验结果这是一个新发现的整合子,其结构为籰一玜中籰猘点突变形成的亚型,未能从该菌株抽提到质基因可能存在于一个低拷贝的质粒上。碳俚グ鶵携带型,从该菌株中检测到两个以前未见报道的整合子,其中一个整合子介导猯型。这两—痑,商岣遶一』基因的表达水平。余株革兰阴性菌中株整合子初筛阳性,且在一株细菌中检测到型整合子。上二海第六人民医院来源的菌株中未检测到株。,这是中国大陆地区首次报道该型荒邗0访福谜献邮且桓以前未见报道的整合子。由虾H鸾鹨皆鹤粕丝品掷氲囊恢甓嘀啬鸵┩碳俚グ检出两种首次发现的整合子,其中一个介导猯型,该菌的多重耐药性与整合子介导的耐药基因有关。菌株比阴性菌株的耐药性强,整合子所携带的耐药基因在细菌的多重耐药性中发挥重要作用。胞菌的同源性,发现它们属于同一克隆株,这些菌株均分离自上海瑞金医院灼伤科,可能是该科室的流行菌株。关键词胺酶;整合子
一,瓵甅.、.。猯、、、、、、、、,,、、猯,琣、、一、‘...琫猯、猯、、、,.甦琍,.瓵,.、..、一、一、’琍—
.⋯,’,,,.甈。甌篶一一———痑.,—.,
;—遥,甦‘甈;甌/.甌畂—..甇..
整合子是~种能识别并俘获移动性基因盒,具有位点特异性的基因重组系统。通过整合子的位点特异性基因重组机制使细菌耐药基因蚝術⑸┥ⅰU献颖旧砦法转移,但常常出现在转座子及接合性质粒上,以其作为自身转移的载体。基因盒在特异性重组酶厦作用下重组到具有同源性的接插入特定位点,从而使被插入的细菌含有相应的耐药基因。但目前在革兰阴性细菌中的分布情况,并分析整合子对细菌耐药性的影响。一个主要原因,目前已知多种荒邗0访甘怯烧献咏榈嫉模渲包括狄籰、一—一菶虲一、、、、一一虸一等簆一内酰胺酶,、、、玪和等一内酰群荒邗0访截止年。碳青霉烯类抗生素是目前抗菌生长,特别是能有效治疗产超广谱邗0访和持续高产嗤锋呔孛酶母锢家跣愿司碌母腥荆妇前言短序列騛之间。通过这种方式,一个或多个基因盒直国内对整合子介导的耐药性尚缺乏系统的研究。本研究调查了整合子革兰阴性杆菌产荒邗0访甘歉锢家跣愿司钥股啬鸵┑猯和等其他築~内酰胺酶。、、、猯、胺酶,一、、一、ⅱ騉一等谱最广的邗0