文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
骨髓基质细胞复合B-磷酸三钙修复下颌骨缺损的实验研究
姓名:何悦
申请学位级别:博士
专业:口腔临床医学(口腔颌面外科)
指导教师:张志愿
20050401
旌学位论文作者签名:蕊日期:山逝△堕垆学位论文独创性声明学位论文使用授权声明。·,.如日期:辏:本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校葙权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利日的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被壹阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。作者签名日期导师签名
骨髓基质细胞复合磷酸三钙修复下颌骨缺损的实验研究中文摘要伤的模式。如何改进甚至超越这种模式值得深入思考和研究。近年来,随着在应用组织工程的方法和技术,通过体外复合犬骨髓基质细胞和三维磷酸三钙支架的方法构建组织工程化的个体化缺损区下颌骨,并对下颌骨节段性缺下颌骨的缺损和缺失可以采用骨移植和人工材料植入的方法加以修复和重建。人工材料和异体骨移植容易引起免疫排异反应和存在可能传播传染性疾病的的缺点。目前临床上最受肯定的自体骨移植又是一种以创伤修复创组织工程学的迅速发展和多学科合作使得利用组织工程技术构建口腔颌面材料和方法恰杌氏赴的体外诱导、分化、增值和相关检测:犬麻醉成功成骨条件培养液,。%:,ケズ褪6忍跫碌姆跤渑嘌O赴长汇合时,ヒ鹊鞍酌写ù绦嘌┰龃炼胞,制备细胞悬液,以/的浓度均匀按种于颗粒状涣姿崛赴牧细春咸迓闶筇迥诔晒鞘笛椋菏笛榉秩每组雎闶螅扛雎闶笃部骨组织,既而对下颌骨缺损进行修复提供了实践的基础和指导。本研究旨损进行修复,探讨此方法的可能性。后,将号骨穿针刺于股骨粗隆处,抽取骨髓尤牒械厝姿,、涣姿岣视湍琒涂够笛K三代细胞。将培养的第二或第三代细胞进行①透射电镜扫描,③流式细胞仪检测,④ㄉ锨呒觳猓芗钚粤姿崦溉旧ǎ軾旧ǎ廾庖组化、、检测。赴牧细春咸宓奶逋夤菇ê统⒔峁构鄄欤菏占谌嘌墓撬杌氏钙支架—,。海:%饱和湿度条件,骨条件培养液中培养堋S谂嘌小时、第臁⒌天取细胞材料复合体进行扫描电镜检查。目的琒腄4琁延科人学博可宦畚
下植入鲅,①植入单纯磷酸三钙,⑦植入未经体外培养的骨髓基质细胞和涣姿崛葡赴牧细春咸澹壑踩胩逋馀嘌天的细胞材料复合体,植入后堋月和氯〕霰瓯荆蠤大体观察,②鄄旌突叶炔舛ǎ珺一磷酸兰钙支架的制作:将犬进行扫描,获得犬下颌骨的三维计算机测捎肧统计软件包对数据进行方差分析妥橹Ч鄄染色接种后—小时,细胞开始贴壁,培养第煜赴奂赏牛天细胞细胞膜完整,核增大,胞浆内细胞器丰富,见大量的高尔基体和线粒体。③流磷酸酶旧ḿ睾稚难粜员泶铩砑臣品治觯虎茏橹染色,染色鄄旒癒成骨荩ü扑慊ㄖ杓坪椭谱鞯姆椒ú捎每焖僭图际踔谱魅买骨纸质模型。在犬下颌骨模型上制备さ慕诙涡匀彼鹉P停源宋D>咧作三维磷酸三钙支架,并进行扫描电镜观察,图像分析系统测定材料孔径的大小和乍物力学测定材料的抗压强度。赴萘细春咸逍薷慈瓼颌骨节段性缺损;收集第三代细胞,以/浓度接种于三维涣姿崛浦Ъ埽逋馀嘌天备植入手术用。植入设实验组和对照组,样本各为V票溉一侧下颌骨节段性缺损模型,植入细胞材料复合体,钛板固定,单纯材料作为对照组。术后堋月、鹿鄄炀植可口情况;术后月行腿琧上瘢皇鹾月将标本进行生物力学检撬杌氏赴奶逋庥盏肌⒎只⒃鲋岛拖喙丶觳猓孩俚怪孟晕⒕迪鹿鄄欤进。步贴壁、增殖,第天细胞进入迅速增值期,至第灭,细胞相互融合达—%,进行传代,传代后细胞增殖加快。②透射电镜扫描见:第鶥式细胞仪检测:第鶥/期细胞占.%,期占.%,谡.%,凋亡细胞占ィ坏代疓谙赴ィ珿谡.%,谡ィ蛲鱿赴.%。④鲋档纳で呒航又峙ǘ任./,觳獾腛底罡摺K孀排嘌焓脑黾樱珺体外增值呈递增趋势,旌笙赴鲋导趸海ト肫教ㄆ凇"莸代钚旧ǹ杉平峤诘难图像分析。结果海第二医科大学博卜刊颗Q宦畚
赴牧细春咸宓奶逋夤菇ê统⒔峁构鄄欤褐Ъ懿牧蟍为多孔松质骨状、质地较脆,亲水性良好。扫描电镜观察:材料呈多三维立体网状结构,孔径表面光滑,平均孔径约啄诹泳对糽。又钟赥上植入后拢珺体外培养组片密度最高,高于体外未培养组和单纯椋籇组少量成骨,单纯槲醇飨猿晒牵琄图像分析三组成骨密度均数分染色见逋馀嘌楣墙涸拖赴饨涸置谕ⅰ鄄欤菏鹾月单纯牧献槿彼鹎兔芏扔埃显,达以上;樾薷辞醇飨晕铡"凵锪ρЪ觳猓旱ゴ组成骨良好,部分支架周围见多核巨细胞吞噬支架材料,可见软骨形成区。性表达。⑦拿庖咦榛共猓杭鸅~