文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
遗传性凝血酶原缺陷症和FX缺陷症的分子发病机制研究
姓名:王文斌
申请学位级别:博士
专业:内科学(血液病)
指导教师:王鸿利
20050420
作者签名:望三主盛日期口折酢、.猳学位论文作者签名:王孓》戎日期:幽船、日期:望咝:坌学位论文独创性声明学位论文使用授权声明辡·岔·沙本人所呈交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中作了明确说明并表示谢意。权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅。有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索。有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。本人完全了解上海第二医科大学有关保留、使用学位论文的规定,学校有导师签名:
遗传性凝血酶原缺陷症和缺陷症的分子发病机制研究中文摘要血因子与缺陷猓渌硐治3H旧逡砸糯ā1纠嗉膊∷淙环病率较低,但患者常自幼发病,终生受累,致残率高,危害性大,甚至死亡,更严重的是遗传至后代。对与本类疾病发生相关的基因突变进行研究,不但有助于确定诊断、有效治疗和优生优育,而且能够为深入认识相关凝血因子蛋白质结构与功能的关系提供线索,丰富和完善对机体止凝血机制的认识。本研究对鲆传性凝血酶原缺陷症家系和鲆糯阅R蜃觴缺陷症家系进行了分子发病后者是调节血栓与止血过程的一种关键酶。遗传性凝血酶原缺陷症是一种罕见的常染色体隐性遗传性出血病,发病率约为1疚乃芯康募蚁迪戎ふ呶岁女孩,自幼有自发出血倾向,父母为近亲婚配。实验室检测血浆凝血酶原时间罨糠帜;蠲甘眆为湍C冈毕葜低凝血酶原血症6阅C冈’端和朔欠为凝血酶原基因纯合突变,其父母均为该突变的杂台子,基因渗断为遗传性低凝血酶原血症。对】刀哉照撸辛司酆厦噶捶从σ幌拗菩云段长度多态性—治觯捶⑾指猛槐洌懦嘶蚨嗵缘目赡堋由于悄C冈肽ち字慕岷瞎讨凶钗V匾5奈坏阒唬梦坏愕耐变可能会影响了凝血酶原蛋白质分子的空间构象,导致凝血酶原促凝活性的下降。经文献检索,凝血酶原突变为国际首次报道,并将其命名为遗传性凝血因子缺陷症是一类单基因遗传性出血病,除血友病虰机制的研究。凝血酶原在凝血过程的第二阶段转变为凝血酶,均显著延长,、所有外显子及其侧翼序列进行聚合酶链反应筒庑蚍治觯戎ふィ硇驼锒“”。汉5诙娇拼笱Р㎜学位论文第】负
缺陷症;基因诊断在家系中发现了一种新的信号肽错义突变,并将其現的活性形式为翘迥谀簗酶原唯一的生理性激活物,在共同凝血途径中起关键作用。遗传性凝血因子毕葜和活性下降,但抗原含量多为正常的。本研究家系先证者为岁女性,父母为近亲婚配。实验室检测示先证者、均延长,%,表型诊断为型缺陷症。基因渗断证实引起该家系缺陷症的原因为槐洌猛槐溆牍噬弦驯ǖ赖相同,为国内首次报道。家系南戎ふ呶昱裕笛槭壹觳馐为型缺陷症。基因诊断发现,先证者为两种新突变虯的双重杂合子,分别遗传自其父母。对于剪接位点突变ü戎者外周血白细胞的异位转录没有检测到来自突变等位基因的异常转录本,提和构建突变体进行了体外表达的研究,采用⒚庖哂ü馊旧ê拖赴置诘鞍谆钚圆舛ǖ仁匝橹な担槐渌淙徊换嵊跋霧鞍椎暮铣珊头置冢捎谄涫荈肽R子岷系闹匾N坏悖槐浠嵯灾档虵鞍椎拇倌钚浴<蚁的先证者为岁男性,因严重的腹腔内脏出血而入院,其父母为近亲婚配。表型诊断示和延长,活性和抗原分别为%和ィV匦偷腎型其发病的分子机制。—定量な担琒一槐淠┯跋霧虻转录水平;真核细胞表达试验结果显示转染突变质粒的细胞其细胞内外的抗原分别为正常的%.ィ幻庖哂ü馐匝橐嘞允就槐渲柿WH镜南赴ü明显低于野生型质粒转染的细胞;脉冲追踪—试验发现在同位素追凝血因子殖莆猄甈毕葜ⅲ⒉÷试嘉/病一般分为两种表型:活性和抗原含量同时减低的交叉反应物质阴性一,先证者、均显著延长,活性和抗原分别为%和示槐淇赡艿贾伦B嫉膍谔迥谘杆俳到狻6杂贏突变,通过克隆野生型命名为“”。随后对该突变进行了体外表达的研究来深入研究8ィ硇驼锒上海第二医科大学博士学位论文
关键词:凝血酶原;凝血因子蝗毕荩撼鲅#换颍和槐洌惶逋獗达;分子机制踪过程中,正常的蛋白中会逐渐由细胞内分泌到细胞外,相反,在整个陷症的分子机制。分钟的追踪过程中,仅有极少量突变蛋白会分泌到细胞外,提示突变导致了蛋白的分泌障碍。进一步采用无细胞蛋白翻译试验研究分泌障碍发生的分子机制,结果显示:突变蛋白的翻译合成正常,但在微粒体膜存在的情况下,没有如野生型蛋白一样观察到翻译后的加工过程,如欢颂腔得鞔槐涞男藕烹牟荒芤糉鞍捉肽谥释蟹牒蠹