文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
遗传性FXI缺陷症和遗传性FⅧ缺陷症的分子发病机制研究
姓名:武文漫
申请学位级别:博士
专业:内科学(血液病)
指导教师:沈志祥
20040429
遗传性毕葜⒑鸵糯訤缺陷症的分子发病机制研究中文摘要遗传性凝血因子缺陷症是比较少见的遗传性出血性疾病,患者常表现为自发性出血或止血困难,症状反复可持续终身。遗传性凝血因子缺陷通常是由编码该蛋白的基因突变所导致的。本研究对鲆糯阅R蜃觴缺陷症家系和一个遗传性肽R蜃覸联合缺陷的家系进行了分子发病机制的研究。鼺缺陷症家系均来自上海周边地区,先证者均无严重的自发性出血倾向,仅个别有轻微的牙龈出血及手术后止血困难。家系成员无相似临床表现,仅家系部分成员有与先证者类似的临床出血表现。凝血象检查发现先证者的活化的部分凝血活酶时间延长,而凝血因子水平低于正常,其中,家系和南戎者篊的水平低于ィ蚁先证者的篊低于正常的%。家系成员的基本正常,部分稍有延长,而其篶也低于正常的%。对编码幕У乃型庀宰蛹捌洳嘁硇蛄杏τ镁酆厦噶捶从扩增后,直接测序,分别在这些家系中发现导致较陆档幕蛲槐洌琓蚑。其中、、为国际首次报道。结合突变对糯匀毕莸囊糯氐憬蟹治觯⑾諫呈现类似显性遗传的特点,杂合子篊的水平低于通常推测的%左右的水平,而是在正常的%左右。由于成熟的肿邮且远厶宓男问酱嬖谟谘=械模因此,有可能突变等位基因编码的チ从胝;虮嗦氲腇单链间形成异源二聚体,从而显现出所谓显性负作用的特点,导致突变杂合子乃浇徊较降。对谔逋饨械拇槐昙鞘匝橹な盗苏庖煌坡邸S捎贔分子中的结构域直接参与二聚体形成,其他结构域,如,是否对厶逍纬捎杏跋目还不是十分清楚。结合本研究中所发现的位于中的突变哉庖晃题进行了初步探讨。在构建了含耐槐浔泶镌靥搴蠼械奶逋庾H颈泶试验证实该突变是导致陆档脑颉6ê蠥褂蛲槐銵和结构域突变谋泶镌靥宸直鹩胍吧虵载体共转染试验表明,突变载体均可使正常谋泶锵陆担褹峁褂虻耐槐渌贾碌囊吧虵表达下降的幅度相近,前者所导致的下降稍明显,提示结构域虽然不直接参与体的形成,但是在促进厶逍纬傻墓讨锌赡芊⒒又匾5淖饔谩上海第二医科大学博士学位论文第
遗传性隖联合缺陷是一种非常罕见的遗传性疾病,目前仅有极个别病例报道。本研究对~例隖联合缺陷家系进行了临床表型及分子发病机制的研究。先证者篊低于正常的ィ鳩:鲇姓5プ笥摇6曰者的钚圆捎没诙诜ㄔ淼姆⑸ǖ孜锓ḿ觳猓浣峁胍黄诜ǖ慕峁近。应用觳馐约梁卸曰颊叩腇抗原进行检测,发现其抗原水平明显高于正常,达正常的ィ氏纸徊娣从ρ粜的特点。由于隖在编码基因以及合成分泌途径上均不相同,提示联合缺陷是由于分别编码这两种蛋臼的基因的突变所导致的情况,对癋编码的基因虵儿分别进行突变扫描,发现虻坏淖榘彼岵谢>ò彼崴娲鳩基因中发现一个国外曾报道过的结构域的突变8眉蚁抵杏兴拿S巡患者,而其共同特点是俅渤鲅1硐钟胧笛槭壹觳樗⑾值腇:环颊叩腇:低于正常水平的ィ槲V匦停橇俅簿扪现氐牡某鲅1硐帧N颐嵌云渌可能导致血栓发生的危险因素如凝血因子槐洌C冈/嗵裕鞍證、蛋白约翱鼓C竧冉辛思觳猓捶⑾忠常。鞍资且恢滞岷系鞍祝墒霧蛋白的重链和轻链的和结构域间即通过与铜离子的结合连接在一起。但是鞍字芯咛宓耐岷喜课簧胁清楚,计算机模拟分析提示位组氨酸残基是铜结合位点,但是体外人工设计的突变体并没有对幕钚院捅泶镌斐煞浅裳现氐挠跋欤虼瞬⒉恢С终一推论。因此我们对蛲槐涠莝菇颂逋獗泶镌靥褰刑逋獗泶镅芯俊在转染和赴蠓⑾指猛槐涮灞泶颋的特点与患者临床表现相似,细胞上清的篊仅为野生型ィ鳩:的水平超过正常的丁N们的结果显示坏闶荈结构与功能中一个非常重要的位点。泶锕讨校矶嘈潞铣傻腇分予被内质网滞留降解,以往研究认为结构域是细胞内滞留作用发生的主要结合位点,本研究应用酶降解抑制试验发现,具有突变的肿佑胍吧虵分子在细胞内的滞留程度类似,并未影响的分泌,直接证实虽然抑制置诘慕峁刮挥诘腁峁褂颍玪位氨基酸残基在该过程中作用有限。上海第二医科大学博士学位论文第
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引言编码这些凝血因子的基因都已明确定位并基本测序清楚,这为探讨该类遗传性疾病凝血因子是维持止血血栓平衡的重要组成部分,凝血因子的缺乏将会导致程度不等的出血发生,临床上凝血因子缺乏分获得性和遗传性两类,其中由于基因改变导致凝血因子数量减少或功能异常的遗传性凝血因子缺陷症是一类相对较为罕见的遗传性疾病,这类患者常因为终身的出血症状而需要反复输血等替代治疗,有学者将其通称为血友病,根据发病是