文档介绍：常用微生物染色方法
泰兴市人民医院检验科微生物室刘鸿丽
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1、革兰染色 2、抗酸染色 3、墨汁染色
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革兰氏染色
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革兰氏染色原理
一通透性学说
二等电点学说
三化学学说
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G- / G+ 细菌细胞壁比较示意图
肽聚糖层
磷脂层
LPS
磷壁酸
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革兰氏阳性菌细胞壁结构比较致密,肽聚糖层很厚,脂类含量较少,酒精不易渗入,而且95%酒精可使细胞壁脱水,间隙变小,通透性降低,阻碍结晶紫-碘复合物渗出;
革兰氏阴性菌细胞壁结构比较疏松,肽聚糖层很薄,外膜、脂蛋白、脂多糖均含有大量脂质,易被酒精溶解,致使细胞壁通透性增高,细胞内的结晶紫-碘复合物被酒精溶解洗出而脱色。
原理
一通透性学说
二等电点学说
三化学学说
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革兰氏阳性菌等电点(pH 2-3)比革兰氏阴性菌等电点(pH 4-5)低,加之媒染剂碘为弱氧化剂能降低革兰氏阳性菌的等电点,因此在同样的pH的染色环境中,阳性菌所带负电荷比阴性菌多,与带正电荷的结晶紫染料能牢固结合,不易被酒精脱色。
原理
一通透性学说
二等电点学说
三化学学说
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革兰氏阳性菌含有大量核糖核酸镁盐,其可与结晶紫-碘结合成大分子复合物,因而不易被95%酒精脱色;而阴性菌中此物质含量较少,因而吸附染料量很少,分子量也较小,故易被酒精脱色。
原理
一通透性学说
二等电点学说
三化学学说
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细菌涂片的制备
涂片:取一张洁净载玻片,用已灭菌的接种环取一环生理盐水于玻片中央,再将接种环灭菌,取菌与生理盐水磨匀,涂布成1cm×1cm大小区域的均匀薄膜,使盐水磨成灰白色为宜,接种环灭菌后放回试管架。
干燥:涂片最好在室温下自然干燥或将标本片涂抹面向上,置酒精灯火焰上半尺高处慢慢烘干。
固定:常用火焰加热法,手执载玻片一端,标本面向上,迅速来回通过火焰三次。
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注意点
⒈取菌量不可太多,涂片应均匀,否则影响染色结果
⒉干燥时切忌高热,以免细菌变形
⒊固定时温度不可过高时间不可长,以防涂抹面
烧焦及玻片烧裂
固定的目的
杀死细菌,使菌体蛋白凝固,染料易于着色
改变细菌通透性,以利于染料进入细胞内
使菌体与玻片粘附牢固,在染色时不致被染
料和水冲掉
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