文档介绍：上海第二医科大学
博士学位论文
HLA-E与母胎免疫耐受的初步研究
姓名:赵亮
申请学位级别:博士
专业:免疫学
指导教师:范丽安

喾肿親、⋯要的。因此狙芯磕庖栽虿幻饕畋に考逋兰堕笙兰垦塑查兰堡主丝皇塑兰瓻与母胎克疫耐受的初步研究和堑堡直血廷堡金延—@,与侵袭母体蜕膜的胎儿绒毛外滋养层细胞密结合槽的亲和力最高。在胎盘形成过程中,胎儿绒毛外细胞滋养层结合,且这种结合可以被抗单克隆抗体所阻断。这些发现表明,采用地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术,对上海地区汉族例原因不明习惯性流产病人、。因此有人提出,母体蜕膜细胞与胎儿绒毛外细胞滋养层细胞之间的相互作用对胎儿的着床及胎盘形成可能具有重要的调节作用。而细胞受体对滋养层喾肿拥氖侗鹪蚩赡苁嵌呦嗷プ饔玫姆肿踊瓻的细胞表面表达受列衍生多肽的调节。其中尤以肿拥南鹊夹蛄卸嚯挠際—肿涌乖表达高水平的瓽和少量的瓹,二者的先导肽均可与瓻分子结合而实现瓻分子的细胞表面表达。另外,最近的一些研究也证明了狤分子在滋养层细胞表面的表达。与此相对应的是,流式细胞术分析发现所有蜕膜赴泶细胞抑制性受体,而且其表达的量相当于外周血细胞的倍。%以上的蜕膜细胞均可与可溶性的瓻四聚体复合物进一步深入分析狤—/乖谔ヅ套糯补讨械南嗷プ饔檬欠浅1个方面探索瓻在母胎免疫耐受中的作用为探索瓻基因多态性与原因不明习惯性流产及妊高征的关联,我们测。结果在和对照组中狤亲畛<牡任换颍虷—鹊夹博士研究赫粤导师:范丽安研究员\,/,
克隆与表达著性差异。┦。重组质粒经昂笊秆「叩味鹊牟《〖坝邢尴∈停检测外源诎邢赴谋泶铩<觳饨峁允荆庠碒分子在经/的细胞表面表达;这些结果表明我们成功设计和构建了嗨撤醋颖泶镌体/⑹,为瓻的体外功能研究提供了有力的实验材料;同时也证明了瓵的先导序列多肽能够促进瓻分子的细胞表面表达。基因频率分别为%、.ズィ浯问荅分别为.%、和在三组标本中均未检出。检出的龅任换蛟谌橹浔冉暇尴及妊高征的发生没有直接关联。为了探索狤与/细胞受体之间的相互作用及瓻的表达对细胞功能的影响,就必须获得一个狤稳定表达的靶细胞。为此我们决定克隆人类狤并将其表达在嘁跣缘陌邢赴表面表达需要嘞鹊夹蛄卸嚯牡拇嬖冢虼巳绾谓饩稣庖晃侍猓统晌D芊袷现狤分子细胞表面表达的关键。首先我们采用方法从人外周血淋巴细胞克隆获得瓻,并通过内核糖体进入位点将目的基因亚克隆于已经载有的逆转录病毒表达载体希菇ǔ蒆疎多顺反子表达载体疉云贏虻南鹊茧哪苁迪諬分子的细..及抗瓻特异的单克隆抗体进行分析来转染的靶细胞表面获得成功表达,且显著高于瓻阳性对照细胞株.%璸疉哉赵靥遄H镜陌邢赴蛭醇觳獾紿—肿是肿痈春衔锏囊桓鲅堑ノ唬魑狹喾肿佑多肽之间的桥梁,与嚯牡淖芭涿芮邢喙亍NL剿靼槁路肿覶对瓻分子细胞表面表达的影响,/,并通过感染的方法将其转入跣上海第二医科大掌博士论文.%和.%,蚍直鹫ァズィ琀—摘要
—南赴砻姹泶锒訰及∪送庵苎狽第三部分赴赴竟δ艿挠跋的细胞系,利用—.及流式细胞术分析狤分子在靶到瓻分子的表达。本研究结果表明狤分子的细胞表面表达也存在ㄔ谔逋夥直鸱掷氩⒗┰隽薘与∪送庵苎狽:和O赴窘峁允驹诒臼匝榈娜魏涡О斜壤拢醋訰、抑制主要是由表达在靶细胞表面的狤分子所介导的,而且其分子机制主要没有显著性差异。。滋养层瓻的表达对蜕膜淋巴细胞细胞毒功能的影响与癙的发生可能没有细胞的表达情况。检测结果显示外源狤基因在跣缘腡赴砻同样获得表达,而对照细胞及经空载体转染的细胞表面则未检测要观察狤的表达对及帕赴赴净钚缘挠跋欤捅匦牖竦么度相对较高的效应细胞。因此本研究首先通过亲和板凸滔嗫固及赴@每笴蚉岷系目箉单克隆抗体对体外扩增的及赴腇治鱿允荆┰。表明淋巴细胞的体外扩增是成功的。随后我们通过乳酸脱氢酶释放方法,观察了瓻的体外表达对这些淋巴细胞细胞毒活性的影响В喊斜壤直鹞、罢6哉兆榈腘把赴荒苡行芙饩璈—H镜腖细胞,,。这些现象提示癙病人及赴逋庀赴竟δ艿涉及效应细胞/细胞受体对靶细胞表面狤分子的识别。但与正常对照相比,。提示