文档介绍：实验名称:酶联免疫吸附剂测定(ELISA)
系别:机械工程系班号:机械11 姓名:潘霖(同组姓名:肖鹤翀)
作实验日期:2011年 10 月 16 日学号:2011010389
实验原理

本实验采用的间接法测定抗体。大体方法为使抗原结合到细胞培养板表面,并保持其免疫活性。加抗体(一抗)形成抗原-抗体复合物;加酶标抗体;加底物(邻苯二***溶液,用于测定其降解量。底物的降解量=抗体量)由于酶的催化频率很高,故可极大地放大反应效果,从而使测定方法达到很高的敏感度。
实验材料与试剂
聚苯乙烯微量细胞培养板(平板,96孔,本次实验仅用其中30孔,为2B~11D)
酶联免疫检测仪
辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。
包被液:(pH=),,。
稀释液(PBS-Tween)
Tween-20,,蒸馏水加至1000ml。
洗涤液:同稀释液。
封闭液:%的BSA(用PBS配置)。
邻苯二***溶液(底物)
终止液:2mol/L H2SO4。
实验步骤
: 用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1~10微克/孔,每孔加200微升, 37 ℃温育半小时。
:倒尽板孔中液体(注意垂直迅速倒下,防止污染),加200微升洗涤液,反复三次,最后将反应板倒置在吸水纸上,使孔中洗涤液流尽。
,37 ℃温育半小时。
。
: 用稀释液将被检血清作几种稀释,每孔200微升。同时作稀释液对照。37 ℃温育一小时。
。
, 每孔200微升, 37 ℃温育半小时。
。
:邻苯二***溶液加200微升,室温暗处5分钟。
:每孔50微升。
:用酶联免疫检测仪记录OD490nm读数。
实验结果与总结
实验结果(主要以图表形式展出)
实验测定原始数据表
组数
一抗稀释倍数
A490
B
C
D
平均
(无红色标记)
1
空白

2
1/400

3
1/800

4
1/1600

5
1/3200

6
1/6400

7
1/12800

0.