文档介绍：酶联免疫吸附试验(ELISA)
2013-10-10
1. 基本原理
2. 基本类型
3. 操作步骤
4. 注意事项
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基本原理
酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA )是一种免疫测定( immunoassay,IA)。
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,由此进行定性或定量分析。
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抗原抗体反应
可逆性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为:
Ag+Ab→Ag·Ab
抗体的亲和力(affinity),可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab] ,Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原或抗体均能保持原有的结构和活性。
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特异性
抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性。
测定某一特定的物质,而不需先分离待检物。
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最适比例
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敏感性
化学比色法的敏感度为mg/ml水平
酶反应测定法的敏感度约为5-10μg/ml
免疫测定中凝胶扩散法和浊度法的敏感度与酶反应法相仿
标记的免疫敏感度可提高数千倍,达ng/ml水平
例如,HBsAg,。
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免疫测定在临床检验中的应用
由于各种抗原成份,包括小分子的半抗原,均可用以制备特异性的抗血清或单克隆抗体,利用此抗体作为试剂就可检测标本中相应的抗原,因此免疫测定的应用范围极广。
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ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:
(1)固相的抗原或抗体,即"免疫吸附剂"(immunosorbent);
(2)酶标记的抗原或抗体,称为“结合物”(conjugate);
(3)酶反应的底物。
可设计出各种不同类型的检测方法。
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最常用的四种方法
直接法测定抗原;
间接法测定抗体;
双抗体夹心法测定抗原;
竞争法测定抗原。
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