文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
可溶性TRAIL分子的免疫生物学特性研究
姓名:路丽明
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:周光炎

一一一一:一;琂’一生堕丝型躞盟柯⒒鼠锰锰锰皿蜜铡!!凰三兰堡坠童型生:都有表达,因此推测肿佑凶殴惴旱墓δ埽壳叭衔曼垒堡皂可能参中文摘要/将目的基因重新构建入表达载体并分别在真核表达系统和原核表达系统薪斜泶铩@昧魇较赴酢⑾拗菩悦盖幸约暗鞍子〖<觳夥⑾帜并且将纯化蛋白进行尿素梯度透析,从而得到具有生物学活性的蛋白。细胞没有杀伤作用或作用不明显。通过流式细胞术检测受体、蚴墙莘Ψ⑾值腡家族新成员,在人体的大多数器官和组织中与机体免疫系统的调节、体内造血调节、巨噬细胞的平衡维持以及胚胎的免疫豁免。成熟的鞍字饕R阅そ岷匣蚩扇苄缘男问酱嬖冢扇苄缘腡蛋白是膜结合蛋白被蛋白酶水解的胞外活性部分。,并将目的基因插入含有约癓牟庑蛟靥錚。并将含有目的基因的重组质粒转化入中进行大量扩增并鉴定。经测序发现从肿瘤细胞株中获得的目的基因序列与完全一致,而淋巴细胞来源的基因序列的第挥隚煌状伪ǖ懒恕篎常人淋巴细胞和肿瘤细胞的基因均能表达。但在真核表达系统中的表达水平较低,考虑到以下要进行功能性的研究需要大量目的蛋白,所以我们选择了原核表达系统将大量表达的目的蛋白通过—写炕玫絤洞炕牡鞍祝实验证明该蛋白不显示细胞裂解活性,但方法观察到蛋白在体外能诱导多种肿瘤细胞,如、一ⅰ赴凋亡,,:外周血淋巴细胞的表达水平高于肿瘤细胞,一细中的表达明显高于『O赴S纱宋颐茄≡馠魑猻鞍子盏枷赴后观察到明显的细胞凋亡形态学特征:核固缩、核边聚、胞膜出芽和凋亡小体形成等。为了证明蛋白诱导细胞凋亡的信号传导途径可能是通过激活、的免疫生物学功能,我们设计并进行了以下的实验。的基因中的单碱基突变现象。胞的的表达水平远高于其它细胞,芴逶谥琢鲎橹椭琢鱿赴凋亡的信号传导途径的敏感细胞株。蛋白作用的细胞经以及染色途径而生的,本实验还利用荧光定量法检测的活性。结果,,.。’,。
一.——钍尤研统纠俭谩唬鲨表明,、谯蘄鞍啄苊飨允笴一拿富钚韵灾龈撸佣盏糎型堕盐型跛磕绽纪俭盟矿蜜胞凋亡。功能受体假受体关键词:
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细胞凋亡渤葡赴绦蛐运劳羇咖淋巴细胞和细胞也表达鞍住3墒斓腡蛋自主要以涂缒蛋白或可溶性的形式存在。可溶性的鞍资悄そ岷系鞍妆凰堪彼岬鞍在。由于隖耐葱源%,我们推测可溶性的鞍肿釉谡;遄橹械墓惴悍植急砻髌洹ò闱榭鱿露曰遄橹蛞渤莆狝可溶性的鞍桌刺教制涿庖呱镅匦浴引言/是生物机体发育、分化、调节平衡的重要方式之一,是一种主动的生命活动·目前认为细胞凋亡是受多种基因参与和调控的,细胞凋亡的研究在过去的十几年取得了飞速的发展。已发现了多种细胞凋亡相关基因,细胞凋亡的机理也得到一定程度的阐明。现在认为参与细胞凋亡调控的模式有两种阂弧⑾吡L介导细胞色素头诺男藕磐ǖ溃憾⑾赴な芴褰榈嫉男藕磐ǖ馈G罢咧要是家族成员参与的调控,而后者主要包括易宄稍薄辈斡氲牡控。易逵凶胖匾5纳镅Чδ苋鏣细胞的协同刺激、诱导赴鲋和分化、活化巨噬细胞、通过诱导凋亡起到免疫监视和免疫调节的作用等。所以目前被发现的个易宄稍背晌P碌难芯咳鹊悖乇鹗怯蒞等在年根据易宄稍钡耐葱孕蛄锌寺〔⒚.,其结构与已知的易迤渌稍辈煌予以转录本形式存在于人体的大多数器官和细胞”,如胚胎的肺、肝脏和肾外周血淋巴细胞、心脏、胎盘、肺脏、骨骼肌和肾脏等,同时被激活的酶水解的胞外活性部分,由被嶙槌桑R匀厶寤钚孕问酱是无害的,这种保护机制可能是由于存在不同的受体。目前已知鞍受体共有四种,分别是粲赥受体的超家族,它们的胞外配体结合区都有半胱氨酸富集研究者极大的关注。基因全长为,<分脏以及成人的脾脏、胸腺、前列腺、甲状腺滤泡、子宫、卵巢、小肠、结肠、与可溶性的一样,比膜结合蛋白更具活力。所以本研究拟通过克隆表达,基因皆定位于,、、、可溶性肿拥拿庖呱镅匦匝芯上海第二医科大学硕士论空。,:.
对產的抗性,但是有意义的是此细胞对故敲舾械摹”。这也证明/,、荰功能性受体,属于型跨膜蛋白。、隩胞外段结合后,可以传递凋亡信号,从而诱导细胞凋亡。与珼的同源性分别为%、%,是以糖基磷脂酰肌,连接在细胞上的锚着蛋白,つ┒巳狈死亡受体的胞浆段,主要表达在正常细胞,如外围血淋巴细胞、脾、肺、胎盘等;