文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
日本血吸虫病免疫学诊断方法改进的研究
姓名:王兆军
申请学位级别:硕士
专业:病原生物学
指导教师:薛纯良

日本血吸虫病免疫学诊断方法改进的研究中文摘要唾液作为同本血吸虫病诊断与筛查标本的可行性。颐墙⒘薍本血吸虫兔感目前血吸虫病仍是一个严重的公共卫生问题。在中国其分布于鍪〉染模型,收集兔和慢性血吸虫病人成对的唾液与血清标本,以间接觳阳性即假阳性率,『H搜G份,阳性假阳性率后消失较快,在治疗后芗唇抵痢篎常水平,具疗效考核的潜能。血吸虫病的免疫学诊断,目前主要以血清学检查为主,但血清标本的采集具损伤性,如以唾液标本来替代血清标本,则可避免以上缺点。本实验研究了唾液、血清标本中的抗血吸虫特异性抗体。结果显示兔唾液与血清样本抗体检.%,感染兔血清与唾液样本的水平具显著相关性.,.S胙G灞瓯鞠嗤僖褐锌筍娇煞从惩酶腥竞椭瘟谱纯觥B匝N娌∪送僖嚎固寮觳獾拿舾行晕.%,血清抗体检测的敏感性为/!篎常人唾液荩与敏感性的关键,为此我们划锒抗原也进行了改进研究。我们用狿际踅岷厦庖哂〖<际醵許和牟煌肿恿孔榉萁辛朔治觯⒍杂辛菩Э己饲蹦艿目乖肿咏辛颂纯和鉴定。动物实验证明针对本血吸虫成虫抗原中蔚目固逶谥瘟通过基因工程方法制备抗原,所获抗原纯度高,可以大量生产。不仅可以解决大量诊断抗原的来源,而且利于检测方法的标准化。本实验中我们根据本『鎠蚝蛃幕蛐蛄猩杓屏硕砸铮訮技术从闩本血个县,大约有近的感染者。、~/测的特异性分别为.%抗体检测敏感性分别为/./QG逵胪僖褐械目筍显著相关性“.,%
蛋白。分别以昶作为诊断抗原,用./I检测感染兔与同本血吸虫病人血清中的特异性抗体。吸虫成虫文库中扩增了基因和基因;将它们克隆入原核表达载纯化,凝血酶酶切去除蠡翊炕膕作为诊断抗原,】一和·籹=绢质粒分别转化入大肠杆菌后,诱导表达了分子量约为融合蛋白头肿恿吭嘉娜诤系鞍譍—。融合蛋白经和清检测敏感性和特异性分别为.%和舛.%,并可反应兔感染和治疗状况。人血清中的抗体检测特异性为./毙圆∪和慢性病人检测的敏感性分别为分急慢性感染。以为诊断抗原,兔血清检测敏感性和特异性分别为和.%,可反应感染和治疗状况。人血清检测假阳性率%/薄⒙圆∪思觳獾拿舾行苑直鹞%瓤关键词:狙N婷庖哐д涠贤僖鹤榉菘乖刈榭乖/%,可用于区%/
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一唾液中特异性抗体的检测日本血吸虫病无损伤性免疫学诊断方法的研究疫学诊断主要以血清学检查为主,但血清标本的采集较为复杂且对受检者有一以唾液标本来替代血清标本,则可避免以上缺点。报道在曼氏血吸虫病人的唾液中可检测到抗曼氏血吸虫虫卵的两裎本课题旨在研究唾液标本作为狙N娌≌锒嫌肷覆楸瓯镜目尚行浴日本血吸虫感染兔的唾液和血清目前血吸虫病仍是一个严重的公共卫生问题。在中国其分布于鍪〉个县,大约有近的感染者⋯。在血吸虫病的诊断中,尤其在低度流行区,免疫学诊断被7旱挠τ谩C定的损伤性,患者不易接受,并且针筒、血液、血清也需进行小心的处理。如人唾液中的抗体检测作为一种非损伤性的渗断方法已被用于多种微生物如风疹病毒、肝炎病毒、麻疹、腮腺炎病毒和腥镜募觳饴T诩纳娌「染方面拍斜挥糜诠纬娌⒚装宛铩⑻谐娌『湍页娌≌锒系谋ǖ谰见将唾液标本用于本血吸虫病渗断的报道【俊材料与方法建立同本血吸虫感染动物模型。新西兰白色种兔只,分笼饲养,分别经腹壁接种同本血吸虫尾蚴酢8腥竞埽婊槿桓腥就米右耘/胃饲进行药物治疗。在感染前和感染后每隔二周自兔耳静脉取血,诜掷胙G澹引言喹酮隔周将テヂ晨ㄆ可刺激唾液分泌坎加谕徽衬ぃ℃冻存。
锤次一灞挥米。样本经分离血清样本,.。4娲谩共取得份病人及荨篎常人血清样本。以棉球法收集唾液嬷2∪私耷蚍湃肟谥校蒙喾乇鹗墙哟コ根据蚖姆椒ㄉ宰鲂薷模票缚扇苄缘某媛芽乖3媛讶∽猅。在芤褐屑尤隩溶液使其终浓度为%/。室温间接觳庋G逵胪僖褐械奶匾煨钥固包被孔酶标板,室温过液。多次洗涤后加入∈偷难蚩谷薎过氧化物酶结合物或羊抗兔过氧化物取值。判断标准:每一受检标本的值等于或大于阴性对照值均值收集唾液胄螅∩锨逖杆俣炒嬗谝正常人及血吸虫病人的唾液和血清病人的唾液和灞瓯救∽灾泄不帐∧狭晗氐匝N娌』颊自松覆榈贸,其中男性例,女性例,年龄为辏晕8牧技藤氏厚涂片法粪检血吸虫卵阳性⋯。正常人血清及唾液标本取自上海第二医科大学在校学生。静脉取血龈处,待浸湿后取出挤出唾液揪。螅羧∩锨迅速冻存于一℃。抗原感染兔的肝脏,匀浆后于,,馗次,上清为¨。%甈每孔。獗涤魏蠹尤爰