文档介绍：影响C18色谱柱性能的主要因素
色谱柱与色谱填料的特性
1、柱填料
硅胶纯度
粒径
比表面积
孔径
2、色谱柱的构型
色谱柱直径
色谱柱长度
3、固定相
键合类型
残余硅羟基的影响
反相键合相的保留行为
键合硅胶的稳定性
物理因素
化学因素
柱填料对色谱柱性能的影响
柱填料对C18色谱柱性能的影响:硅胶纯度I
-二羟基萘
-二羟基萘
TF=
Brand W, AQ Column 5μm, ×150mm
Brand Z,C18 Column 5μm, ×150mm
Venusil MP C18 5μm, ×150mm
Brand H, C18 Column 5μm, ×150mm
Brand U,C18 Column 5μm, ×150mm
!
TF=
TF=
TF=
TF=?
流动相: 甲醇:水=65:35
流速: 1 mL/min
温度: 35℃
检测波长: 230 nm
进样量: 20 μL
硅胶纯度-金属含量
柱填料对C18色谱柱性能的影响:硅胶纯度II
硅胶纯度-金属含量
d
柱填料对C18色谱柱性能的影响:粒径
硅胶粒径和类型对柱效的影响
d
硅胶粒径和类型对压力的影响
柱填料对C18色谱柱性能的影响:粒径II
目前市场主要可供选择的填料粒径
,, - 快速液相色谱柱:匹配快速色谱仪
- 多孔壳层:在常规液相色谱仪上实现快速分离(Halo)
, - 普通快速分析
- 常规分析
颗粒越小,柱效越高,
但是耐污染性能下降,柱压升高.
柱填料对C18色谱柱性能的影响:比表面积
每克填料的表面积,与粒度,孔径有关
比表面积大,保留增加,载样量增加,平衡时间增加(梯度洗脱尤为注意)
根据需要选择合适的比表面积
柱填料对C18色谱柱性能的影响:孔径I
多孔材料的95%以上表面在孔内部
样品分子直径小于平均孔径,才能进入微粒内部
孔径至少是样品流体学直径的4倍
300Ǻ孔径用于:超过50个氨基酸的肽或25个残基的低聚寡核苷酸
样品分子直径小于平均孔径,才能进入微粒内部
柱填料对C18色谱柱性能的影响:孔径II
小生物分子的保留值在小孔径填料通常更大
条件: C8色谱柱,×150mm, ,
A溶剂,%TFA水溶液;
B溶剂,%TFA于80%乙***- 水中;
20min梯度,10 30%B;60°C,
色谱柱的构型对色谱柱性能的影响