文档介绍：上海第二医科大学
硕士学位论文
纤溶酶-α<,2>抗纤溶酶复合物检测方法的建立及其初步临床应
用
姓名:李建新
申请学位级别:硕士
专业:临床检验诊断学(免疫学测定)
指导教师:罗伟;李稻
克隆抗体。特异地针对纤溶酶重链,它与队拖巳苊冈从Χ挥隥:一纤溶酶一Ⅱ:抗纤溶酶复合物检测方法的建立及其初步临床应用中文摘要亲和层析分步洗脱法从尿激酶激活的新鲜人当机体纤溶激活时,豢瓜巳苊籄迅速与纤溶酶纬晌藁钚缘南巳苊敢籥豢瓜巳苊父春衔琍标志着体内纤溶酶的生成和抗纤溶酶的消耗,与机体许多生理病理状态有关,。检测难=娇梢苑从诚巳苊干桑晌Q芯坎±碜纯鱿碌南巳芟低承为提供一项有用的指标。过去测定捎枚嗫寺】固寤岬贾陆徊娣从ξ侍狻T赑形成的过程中,随着瓵然穗募狭眩巳苊富钚晕坏闼堪彼岵谢險,.羧基端亮氨酸残基形成新共价键,分子的构象发生改变,呈现了新的抗原性。新抗原的出现为获取直接针对新抗原结构的单克隆抗体提供了可能性,基于此设计的免疫分析方法测定=,或—乏血小板血浆中提取J褂谜饬街址椒ǎ寄艽用縄血浆中获取纯以C庖咴票噶艘幌盗姓攵孕驴乖峁购拖巳苊钢亓吹牡克隆抗体。单克隆抗体.。特异地针对驴乖峁梗挥隤反应而不与纤溶酶原及瓵从Γ訮的亲和常数为。5反应,它对⑾巳苊冈那缀统J直鹞.、一。籥,
哂蟹浅O灾砸庖錰。厂患者。椤组的较灾哂谙低扯裥灾琢鲎椤⒏尾∽椤关键词:】固澹噶C庖呶訪N0豢固澹訪#备趸锩附岷衔镂<觳饪固澹建立了检测募幸籺法酶联免疫吸附试验。该法的线性检测范围为~%~.ィ厥章饰%~ァ<尤癵/的瓵⑾巳苊敢籥,巨球蛋白复合物于血浆中对觳馕抻跋欤砻鞲梅椒ǹ杀苊饨徊娣从ξ侍饧扒疤宸肿拥母扇拧M过例临床标本平行测定,该法与美国綪试剂盒的相关系数为初步临床应用表明,健康老年人组、正常妊娠组、急性髓系细胞白血病椤⒓毙砸籺」K组、肝病组、消化系统恶性肿瘤组的平较正常人组显著增高。,桶籽2』颊叩难=琍显著高于其它类型正常妊娠组和老年人组。消化系统恶性肿瘤组、肝病组、正常妊娠组与老年人组之间比较则无显著性差别。诮迪酥瘟撇∪酥邢灾龈撸./,提示纤溶系统被广泛激活。以上结果表明,该法可用于研究纤溶系统激活,可为评估生理、病理状况下的纤溶系统行为提供一个有用的工具。附试验,临床应用×\/、//\
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新共价键,分子的构象发生改变,呈现了新的抗原性的血浆水平与风湿性疾病活动程度及肝病类型也有一定关系【。检测姆椒ㄖ饕S心匝榧澳种剖匝椤⒎派涿庖叻治觥⒚噶基端肽键断裂,纤溶酶活性位点丝氨酸残基与,.。该复合物标志着体内纤溶酶的生成和抗纤溶酶的消耗【,与机体许多生理病理状态有关,为进行着的血栓形成一血栓溶解事件的良好标志物。国外研究表明,检测悦稚⑿匝9苣谀齀及前瓺恼锒嫌泻芨叩拿舾行裕兄谄拦繢的发生和发展以及指导临床治疗【;勺魑Tげ暌陨系慕】道先诵募」K婪⒉∥险度的独立指标【;检测兄谇植煌俅怖嘈偷募毙阅怨K,有助于自发性蛛网膜下腔出血病人的病情严重程度及预后判断【;可作为肿瘤类型、发展阶段及生存预测的评价指标【;可作为预测术后深静脉血栓形成挠杏弥副闧豢勺魑D酝馍嘶颊卟∏榧霸ず笈卸系目煽勘曛疚铩;免疫吸附试验取9ゲ舛≒所用抗体多为抗血清或分别针对前体分子巳苊冈蚢:一抗纤溶酶:牡タ寺】固澹捎谡血浆中纤溶酶原和瓵嘉狿的倍,采用这些抗体会导致交叉反应或前体分子干扰觳獾任侍狻T赑形成的过程中,随着瓵。新抗原的出现提供了获取直接针对该结构单克隆抗体的可能性,基于此设计的免疫分析方法测定杀苊馇疤宸肿酉巳苊冈廷颍瓵母扇拧N颐且源尤诵鲜血浆纯化的C庖咴票噶颂匾斓卣攵孕驴乖峁辜跋巳苊钢亓吹单克隆抗体。以此为基础,建立了检测血浆募行腅法。经方法学评价和初步临床应用,效果满意。籥
第一部分纤溶酶原及纤溶酶颍嚎瓜巳苊父春衔锏拇炕材料和方法新鲜人血浆购自上海市血液中心。尿激酶为上海市医学工程研究院庞骏购自瑞典尽一氨基己酸为上海试剂三厂产品。、丙烯酰胺、琋’.亚甲基双丙烯酰胺皆为进口分装。次高相对分子质量标准蛋白质为中国科学院上海生物化学研究所产品。鼠抗人纤溶酶原血清为本室以美国诊断产品公司峁┑娜斯劝彼嵝拖巳单克隆抗体为产品,该单克隆抗体既可以与天然型阂籄从Γ挚捎隤复合物反应。辣根过氧化物酶瞥澹琒公司昙堑难蚩故驣抗体蚩鼠为本室制备,工作浓度为F渌约辆9治龃炕蚪柱层析系统为静罚缬尽⒆R粕璞讣