文档介绍：上海第二医科大学
博士后学位论文
幽门螺杆菌外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定及其外膜蛋白质组
学的研究
姓名:庞智
申请学位级别:博士后
专业:内科学(消化系病)
指导教师:萧树东
20030801
幽门螺杆菌外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定及其外膜蛋白质组学的研究博士后庞智指导教师萧树东教授中文摘要第一部分幽门螺杆菌饽さ鞍椎幕蚩寺〖氨泶隆及表达。方法:畃闚用附盖械目诘幕云蜲背景:幽『莞素緋是全球人群感染最广泛的致病菌,现已被公认为’隧性胃炎和消化性渍疡的重要致病冈子,剪与肖腺癌和胃淋巴瘤形成关系密切。,疫卣可能成为控制这一全球范围感染的有效措施。畃呙绲目7⒓撼晌D壳把芯康娜鹊恪D康为探索研制疫苗的新途径,我们对幽门螺杆苗饽さ鞍进行基冈克经培养和收集后,采用酚:氯仿抽提和纯化基冈组7直鹕杓埔颬蚉⒁愿没蜃镈作模板,以椒ɡ┰外膜蛋云巍9菇╬—刈楸泶镌靥迨保琾质粒载体和纯化的锞鵌限制性内切酶和盖衪;彳,籣重纠丁南嘤γ盖形坏阒洌硬镒;顺Ω司鷛稡。挑选转化克隆、提取质粒,并进行虷盖斜鞪椒ḿǎ%,筛选出插入目的基因的阳性克隆,命名为L取单个含重组质粒的工程菌一粜钥寺。信嘌鸌盏表达后,经狿械鞍妆泶锏募ā=峁焊媚康幕騊产物全长共嗦龅;岵谢槌傻亩嚯约。狿觳獗砻鳎缬就计咨舷允緇条相对分子苗约男律鞍状琹细菌总货向的ァ1砻饔膄莞司外膜蛋向冉勺基闪幽门螺杆菌外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定及其外膜蛋白质组学的研究
第二部分重组幽门螺杆菌饽さ鞍椎拇炕疤匦约为目前研究的热点。目的:对重组幽门螺杆菌饽さ鞍兹肆坑盏急泶镉闕纯化及特性鉴达的产物确具有抗原性。这一结果提高了冢痾//疫苗应刚中的可行性。结论:幽克隆及重组表达成功。结论:,并可作为抗原用于踦腥净颊哐G迥さ鞍卓固宓募觳狻关键词幽门螺杆菌:疫苗;外膜蛋白:基冈表达背景:根除畃南执瘟剖且钥股匚V鞯摹叭!被颉八牧!、停药后复发和再感染等问题,使其难以在人群中推应用。趐呙缈赡艹晌?,。方法:挑取单个含重纲质粒程菌一粜钥寺。信嘌襧诱导表达亓,:对诱导表达厉纯化的鞍拙璖觳獗明,电泳图谱上仅显示跸喽苑肿恿吭的蛋白带,纯度达%。,表明所表『莞司外膜蛋白有望成为新的呙绾蜓》肿樱⒖勺魑?乖枚琾感染患者血清膜蛋向抗体的检测。关键词幽门螺杆菌;外膜蛋白;纯化:免疫印迹;疫苗幽门螺杆菌外膜蛋白的基因克隆和特性鉴定厦其外膜蛋白质组学的研究中文摘要
。结果:采用样品直接加入重泡胀溶液的形式,增人了溶解性,背景:幽¨螺杆菌鞍字首檠芯康闹饕J侄问嵌旱缬瓺、计算机图像分析和蛋白质鉴定技术。目的:建立分离,外膜蛋白质组的方法,比较不同胃病相关菌株外膜蛋白质组图谱的差异,为研究外膜蛋白的免疫蛋白组学提供技术基础。方法:,培养后收集细菌,用十二烷基肌氨酸钠提取外膜蛋白。用缩短聚焦时间、增大样品负荷量,提高了分辨率,重复性好:,两者的二维图谱相似,大部分蛋白都能较好地重替。畃和畃分别有主蛋白斑点个个鞯鞍装叩蛋斑点,两者有个相同的士蛋白斑点,但其蛋向含量略有差异。分析显示,两组的蛋白斑点火部分在偏酸性区域—......欢鳰均为>チM贗蛋白库中进行检索,这龅鞍字示V苤侍崽ㄐ废。结论:不同胃病相关的菌株外膜蛋白存在许多共同蛋白斑点渲杏行┑:幽¨螺杆菌:外膜蛋白质组:旱缬荆患扑慊枷蠓治幽门螺杆菌外膜虽白的基因克隆和特性鉴定及其外膜蛋白质组学的研究中文摘要
第四部分幽门螺杆菌的免疫外膜蛋白质组学及其与胃部疾病的关系定作为临床诊断的候选分子。经免疫蛋白组学检测的资料与公接数据库进行对比分析,以有背景:幽莞畃一种人体致病菌,它可感染胃粘膜井引起炎症过程,导致胃炎、胃溃疡和胃癌的发生。目前已采用多种方法检测和在不同胃病患者中比较了菌株的变异性。目的:本研究选择一种以蛋白质组学为基础的途径检测,.暮蜓】乖用于诊断、治疗和疫苗开发,并且探讨特异的免疫应答和胃部疾病临床表现之间潜在的关系椒ǎ貉∽跃氛镂N赶侔┗颊呶刚衬し掷氤