文档介绍：上海交通大学
硕士学位论文
杂环芳香化合物降解菌群与降解基因克隆方法研究
姓名:洪璇
申请学位级别:硕士
专业:微生物
指导教师:赵立平
20080101
上海交通大学 2008 届硕士论文
杂环芳香化合物降解菌群及降解基因克隆方法研究

摘要

杂环芳香族化合物是工业废水处理过程中的主要的污染有机物。目
前已开发出很多高效的去除这些污染物的方法,然而,人们对处理过程
的生物降解机理并不是很清楚,对参与生物处理的微生物的区系结构、
主要的功能菌以及降解相关基因也知之甚少。
本研究主要采用微生物分子生态学技术及基因克隆技术,对降解喹
啉和吲哚等杂环芳香族化合物的工业废水系统中的主要功能菌进行研
究,对微生物区系进行解析,并进行克隆降解基因的方法探索。
在本研究中,以取自上海焦化厂废水处理系统的活性污泥为种子污
泥,采用含有高浓度吲哚的人工废水,驯化了一个反硝化反应器和一个
厌氧反应器。经过大约6周的驯化后,两个反应器均达到稳定而高效的污
染物去除能力,±
%±%。通过16S rDNA克隆文库技术和16S rRNA V3区基因
的PCR-DGGE分析,对两个反应器的微生物群落结构进行研究。
研究结果表明,两个反应器的微生物区系组成和种子污泥有很大区
别,说明种子污泥在含吲哚的人工废水中进行驯化时,在反硝化和厌氧
条件下降解吲哚的微生物被富集。在反硝化反应器中,Beta-proteobacteria
是最优势的类群,其中Alicycliphilus,Acaligenes和Thauera可能是主要吲
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哚降解菌。而在厌氧反应器中,Clostridia和Actinobacteria是最优势的类
群,可能也是厌氧条件下的主要吲哚降解菌。尽管两个反应器文库的微
生物群落多样性指数差异不大,但在科和属水平的微生物区系组成却区
别很大,而造成这个区别的唯一驱动力就是硝酸盐的存在与否。
吲哚反硝化反应器与之前实验室建立的喹啉反硝化反应器相比,采
用相同的种子污泥和相同的驯化条件,而微生物群落结构表现出很大的
差异。喹啉驯化的群落中所有的OTU都属于Beta-proteobacteria,而吲哚
驯化的群落中Beta-%,吲哚驯化的群落具有更高的多
样性。两个群落的优势OTU也不同,喹啉驯化群落中Thauera及其它
Rhodocyclaceae科的微生物占整个群落的73%,而吲哚驯化群落中优势
amonadaceae科、Alcaligenaceae科和Rhodocyclaceae科等类型
的微生物,%。结果表
明,不同驯化底物对微生物群落结构具有较强的选择作用。这是首次报
道的对高效降解喹啉和吲哚反硝化生物反应器微生物群落结构的比较。
为了对杂环芳香化合物降解菌的功能基因进行更深入研究,本研究
中构建了一套启动子捕获质粒系统。初步摸索了该系统的筛选方法,并
尝试利用该系统,以底物诱导的基因表达筛选方式,从杂环芳香化合物
降解菌以及废水处理系统生物膜样品中克隆相关污染物诱导的基因。

关键词:杂环芳香化合物,降解,微生物群落,启动子捕获
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STUDY ON HETEROCYCLIC AROMATIC
HYDROCARBON DEGRADING BACTERIA AND METHOD
OF CLONGING DEGRADING GENES

ABSTRACT

Heterocyclic aromatic hydrocarbons are major pollutants in industrial
wasterwater treatment. Many efficient pollutant treating techniques have been
developed, but we know little about the position、
major functional species and degrading-related genes.
In this study, molecular microbial ecology technology and genomic
technology were used to analyze the munities in heterocy