文档介绍：目录
实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应 0
实验二氨基酸的分离鉴定——纸层析法 5
实验三蛋白质的性质实验 7
实验四血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳 9
实验五考马斯亮蓝法(Bradford法)测定蛋白质含量 12
实验六血清蛋白质聚丙烯酰***凝胶电泳 14
第二部分附录 17
附录Ⅰ实验室规则与应急处理 17
附录Ⅱ实验记录和实验报告的书写 18
附录Ⅲ实验室基本操作 19
附录Ⅳ实验所需的药品、试剂的配制 22
附录Ⅵ实验所需的设备及其使用方法 25
实验一蛋白质及氨基酸的颜色反应
 一、目的和要求 
1、了解蛋白质和某些氨基酸的特殊颜色反应及其原理。 
2、掌握几种常用鉴定蛋白质和氨基酸的方法。 
二、仪器与试剂
(一)仪器
1、试管;2、试管架;3、恒温水槽;4、酒精灯;5、电吹风机;8、分析天平。
(二)试剂 
1、蛋白质溶液:将鸡蛋清用蒸馏水稀释10~20倍,多层纱布过滤,滤液4ºC保存;
2、氢氧化钠溶液(10%): NaOH,蒸馏水溶解并定容至200mL;
3、硫酸铜溶液(1%); CuSO4,蒸馏水溶解并定容至200mL;
4、甘氨酸溶液(%):
色氨酸溶液(%):
酪氨酸溶液(%):
精氨酸(%):
组氨酸溶液(%):
苯丙氨酸酸溶液(%):
蛋氨酸溶液(%):
半胱氨酸溶液(%):
,蒸馏水分别溶解并定容至200mL,4ºC保存;
5、茚三***水溶液(%):***,蒸馏水溶解并定容至100mL;
6、茚三***-乙醇溶液(%):***,乙醇溶解并定容至100mL,即用即配;
7、头发,指甲屑;
8、浓***():浓盐酸;浓硫酸(分析纯);冰醋酸(一般含有乙醛酸杂质, 故可用冰醋酸代替乙醛酸);
9、苯酚溶液(% ):,蒸馏水溶解并定容至200ml;
10、α-萘酚乙醇溶液(1%): α-萘酚,95%乙醇溶解并定容至100ml即用即配;
11、 NaBrO溶液:2克溴溶于100ml 5% NaOH中,置棕色瓶中,可在暗处保存两周
12、鸡蛋清:
13、偶氮试剂:溶液A(***钠溶于1000ml蒸馏水中);溶液B(,溶解后再加入5ml浓硫酸);A、B溶液分别保存在密闭瓶中,用时以等体积混合。 
14、醋酸铅溶液(10% ): Pb(Ac)2,蒸馏水溶解并定容至100ml;
15、醋酸铅试纸:将滤纸条浸入10% 醋酸铅溶液中,湿透后取出,100ºC烘干即可。
三、实验内容 
对蛋白质及氨基酸的双缩脲反应、茚三***反应、黄色反应、坂口反应、乙醛酸反应、偶氮反应、醋酸铅反应等进行定性确定。 
(一)双缩脲反应
 1、实验原理
当尿素加热到180ºC左右时,两个分子的尿素缩合成双缩脲并放出一个分子氨,双缩脲在碱性溶液中与铜离子结合生成红色络合物,即双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有多个肽键,其结构与双缩脲相似,故能发生此反应,而形成紫红色或蓝紫色的配合物。 
  尿素双缩脲双缩脲络合物(紫红/蓝色)
 2、操作
 取一支试管,加入适量尿素,酒精灯加热至熔化,冷却至室温后;加入约1ml和10% NaOH溶液2ml,摇匀,再加1% CuSO4 溶液两滴,随加随摇。观察颜色变化。取4支试管,按下表操作。
表1—1 操作表
试管1
试管2
试管3
试管4
试管5
蛋白质溶液(ml)
1
—
—
—
—
甘氨酸(ml)
—
1
—
—
—
酪氨酸(ml)
—
—
1
—
—
精氨酸(ml)
—
—
—
1
—
蒸馏水(ml)
—
—
—
—
1
加入10% NaOH溶液2ml,摇匀,再加1% CuSO4 溶液两滴,随加随摇;观察
现象
注意:CuSO4不能多加,否则将产生蓝色的Cu(OH)2。 
 
(二)茚三***反应 
1、实验原理 
除脯氨酸和羟脯氨酸与茚三***作用生成黄色物质外,所有α-氨基酸与茚三***发生反应生成紫红色物质,最终形成蓝紫色化合物。1︰1500000浓度的氨基酸水溶液即能发生反应而显色。
茚三***反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,水合茚三***被还原成还原型茚三***;第二步是所形成的还原型茚三***同另一个水合茚三***分子和氨缩合生成有色物质。此反应的适宜pH为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。此反应目前广泛地应用于氨基