文档介绍：荧光法测定乙酰水杨酸和水杨酸
实验化学3-2
(仪器分析实验)
2018/10/9
1、实验目的
(1)掌握荧光法测定药物中乙酰水杨酸的方法
(2)了解Cary Eclipse型荧光光谱仪的基本操作
(3)强化称量、移液、配溶液等基本操作
2018/10/9
实验原理
电子处于激发态是不稳定状态,返回基态时,通过辐射跃迁(发光)和无辐射跃迁等方式失去能量;
传递途径
辐射跃迁
荧光
延迟荧光
磷光
内转移
外转移
系间跨越
振动弛预
无辐射跃迁
激发态停留时间短、返回速度快的途径,发生的几率大,发光强度相对大;
荧光:10-7~10 -9 s,第一激发单重态的最低振动能级→基态;
磷光:10-3~10s;第一激发三重态的最低振动能级→基态;
2018/10/9
S2
S1
S0
T1
吸
收
发
射
荧
光
发
射
磷
光
系间跨越
内转换
振动弛豫
能
量
l 2
l 1
l 3
外转换
l 2
T2
内转换
振动弛豫
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辐射能量传递过程
荧光发射:电子由第一激发单重态的最低振动能级→基态( 多为 S1→ S0跃迁),发射波长为‘2的荧光; 10-7~10 -9 s 。
由图可见,发射荧光的能量比分子吸收的能量小,波长长; ‘2 > 2 > 1 ;
磷光发射:电子由第一激发三重态的最低振动能级→基态( T1 → S0跃迁);
电子由S0进入T1的可能过程:( S0 → T1禁阻跃迁)
S0 →激发→振动弛豫→内转移→系间跨越→振动弛豫→ T1
发光速度很慢: 10-3~10 s 。
光照停止后,可持续一段时间。
2018/10/9
溶液浓度与荧光强度的关系
有线性关系:
荧光强度 If正比于吸收的光量Ia和荧光量子效率:
If = Ia
由朗-比耳定律: Ia = I0(1-10- l c )
If = I0(1-10- l c ) = I0(1-e- l c )
浓度很低时,将括号项近似处理后:
If = I0 l c = Kc
2018/10/9
分子产生荧光必须具备的条件
1)具有合适的结构;
2)具有一定的荧光量子产率。
荧光量子产率():
荧光量子产率与激发态能量释放各过程的速率常数有关,如外转换过程速度快,不出现荧光发射;
2018/10/9
仪器结构流程
测量荧光的仪器主要由四个部分组成:激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。
特殊点:有两个单色器,光源与检测器通常成直角。
基本流程如图:
单色器:选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器;
光源:灯和高压***灯,染料激光器(可见与紫外区)
检测器:光电倍增管。
2018/10/9
荧光分析方法
特点
1)灵敏度高
比紫外-可见分光光度法高2~4个数量级;为什么?
检测下限:~g/cm-3
相对灵敏度: 奎宁硫酸氢盐的硫酸溶液。
2)选择性强
既可依据特征发射光谱,又可根据特征吸收光谱;
3)试样量少
缺点:应用范围小。
2018/10/9
仪器与试剂
仪器:Cary Eclipse荧光光谱仪,石英比色皿,容量瓶,移液管,玻璃注射器,漏斗,量筒,滤纸。
试剂:乙酰水杨酸,水杨酸,乙醇,阿司匹林药片。
2018/10/9