文档介绍：微生物菌种保藏方法
菌种是一种重要的生物资源,菌种保藏是重要的微生物基础
工作。菌种保藏就是利用一切条件使菌种不死、不衰、不变,以便于
研究与应用。
( 一 ) 常规保藏方法
1 目的
了解菌种保藏的基本原理
掌握几种常用的菌种保藏方法。
2 原理
菌种保藏的方法很多。 其原理却大同小异, 不外乎为优良菌株创造一
个适合长期休眠的环境 , 即干燥、低温、缺乏氧气和养料等。使微生
物的代谢活动处于最低的状态, 但又不至于死亡, 从而达到保藏的目
的。依据不同的菌种或不同的需求, 应该选用不同的保藏方法。 一般
情况下,斜面保藏、半固体穿刺 , 石蜡油封存和砂土管保藏法较为常
用,也比较容易制作。
3 材料
 菌株
待保藏的适龄菌株斜面
 培养基
肉汤蛋白胨斜面,半固体及液体培养基。
试剂
10%HCl 无水氯化钙、石蜡油、五氧化二磷。
器具
用于菌种保藏的小试管 (10*100 毫米 ) 数支、 5 毫升无菌吸管、 l
毫升无菌吸管等、灭菌锅、真空泵、干燥器、冰箱无菌水、筛子 (40
目、 120 目 ) 、标签、接种针、接种环、棉花、牛角匙等等。
4 流程
斜面保藏→半固体穿刺保藏→石蜡油封存→砂土管保藏
5 步骤
 斜面保藏
流程
标记试管→接种→培养→保藏
步骤
贴标签
取无菌的肉汤蛋白胨斜面数支。在斜面的正上方距离试管口 2-3 厘
米处贴上标签。 在标签纸上写明接种的细菌菌名、 培养基名称和接种
日期。
斜面接种
将待保藏的细菌用接种环以无菌操作在斜面上作划线接种。
培养
置 37 恒温箱中培养 48 小时。
保藏
斜面长好后, 直接放入 4 ℃的冰箱中保藏。 这种方法一船可保藏三个
月至半年。
 半固体穿刺保藏
流程
标记试管→穿刺接种→培养→保藏
步骤
贴标签
取无菌的半固体肉汤蛋白等直立柱数支,贴上标签,注明细菌菌名、
培养基名称和接种日期。
穿刺接种
用接种针以无菌方式从待保藏的细菌斜面上挑取菌种, 朝直立柱中央
直刺至试管底部,然后又沿原线拉出。
培养
置 37 恒温箱中培养 48 小时。
保藏
半固体直立柱长好以后, 放入 4 ℃的冰箱中保藏。 这种方法一般可保
藏半年至一年。
 石蜡油封存
流程
标记试管→接种→培养→加石蜡油→保藏
步骤
标记
同 
接种
同 
培养
同 
加石蜡油
无菌操作下将 5 毫升石蜡油到培养好的菌种上面,加入的量以超过
斜面或直立柱 1 厘米高为宜。
保藏:石蜡油封存以后,同样放入 4 ℃冰箱中保存。也可直
接放在低温干燥处保藏。这种方法保藏期一般为一至二年。
 砂土管保藏
流程
制沙土管→灭菌→制菌液→加样→干燥→保藏
步骤
制作沙土管
选取过 40 目筛的黄砂,酸洗,再水洗至中性,烘干备用;过 120
目筛子的黄土备用;按 1 份土加 4 份砂的比例均匀混合后,装入小
试管,装量 1 厘米左右。
灭菌
加压蒸汽灭菌,直至检测无菌为止。
制备菌液
取 3 毫升无菌水至待保藏的菌种斜面中,用接种环轻轻刮下菌苔。
震荡制成菌悬液。
加样
用 1 毫升吸管吸取上述悬液  毫升至砂土管,再用接种环拌匀。
干燥
把装好菌液的砂土管放入干燥器或同时用真空泵连续抽气,使之干
燥。
保藏
干燥后的砂土管可直接放入冰箱中保藏; 也可以用石蜡封住棉花塞后
放冰箱中保藏。
(二)冷冻干燥保藏法
1 目的
 理解冷冻干燥保藏菌种的原理
 掌握冷冻干燥保藏菌种的方法。
2 原理
冷冻干燥保藏菌种法可克服简单保藏方法的不足。利用有利于菌种保
藏的 — 切因素,使微生物始终处于低温、干燥、缺氧的条件下,因而
它是迄今为止最有效的菌种保藏法之一。
3 材料
菌株
待保藏的各种菌种。
 试剂
2% HCl ;牛奶。
 器具
安瓿管、标签、长滴管、脱脂棉、干冰、离心机、冷冻真空装置、高
频电火花器。
4 流程
备安瓿管→备脱脂乳→制菌悬液→分装→预冻→真空干燥→保藏→
活化