文档介绍：南通市第一人民医院检验科质量手册
微生物检验组操作手册
标本的接种与处理标准操作程序(SOP-401)
:规范标本的接种与处理,提高细菌检出率。
-401变动程序:由操作者提出,并经科主任审核。
:各种细菌培养的标本。
:全国临床检验操作规程(第二版)。
:
、鉴定
适用于本项检查的标本是指除血液、尿液和粪便等有特殊处理要求的标本,以及脓、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭子等。
、体征明显时,最好在抗生素使用之前采集。
。
,尽可能保证样本代表感染过程。
,因标本量不足可能产生假阴性结果。
、住院号、来源、特殊部位、采集的日期时间和最初的采集者。
,防止渗漏和潜在的安全隐患,本实验室指定适用于本项检查的容器是无菌试管、无菌拭子、无菌痰杯及各种灭菌标本留取容器。
一般细菌可在合适的培养基(如血平板、巧克力平板)上,在一定的温度、气体等条件下生长繁殖而形成菌落。根据菌落特征、涂片染色镜检、生化反应和血清学试验可做出鉴定。
检验流程
样品→接种→挑取可疑菌落→涂片染色镜检→生化反应、鉴定→报告。
操作说明
、痰、创面、胆汁、CSF、胸腹水、咽拭等。
(痰、CSF需加巧克力平板),35℃过夜,初次分离需5-10%CO2。
,革兰染色镜检。
、鉴定
手工生化试验:
:凝固酶、甘露醇、尿素、新生霉素、麦芽糖、木糖、蔗糖、***盐、多粘菌素B、同时观察菌落颜色和溶血情况。
、肠球菌:触酶、七叶苷、肉汤、%Nacl、CAMP、乳糖、山梨醇、阿拉伯糖。
:KIA、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、麦芽糖、IMViC、***盐。
:KIA、苯丙氨酸、麦芽糖、靛基质、鸟氨酸。
,典型的阴性球杆菌:KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、***盐、丙二酸盐、44
℃。
,氧化酶阴性:KIA、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、葡萄糖、IMViC、***盐。
,氧化酶阳性:KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、***盐、七叶苷、乙酰***。
,氧化酶阳性:KIA、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、***盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP(25℃)。
可疑弧菌,氧化酶阳性:同气单胞菌生化,另加不同浓度Nacl。
:暗产色、光产色、耐热触酶、***盐、尿素、吐温-80。
:45℃生长、暗产色、光产色、MAC琼脂(28℃)、***盐、铁吸收试验(28℃)、5% Nacl肉汤(28℃)、阿拉伯糖、木糖、卫茅醇、枸橼酸盐(28℃)、甘露醇(28℃)。
另见下表:
一般细菌生化反应和鉴定流程
菌落、涂片
鉴定
G-球菌
氧化酶、DNA酶、葡萄糖、麦芽糖、蔗糖或接种API NH
G-杆菌
OX(+) ATB ID 32GN或API 20Ne或手工生化
OX(-) ATB ID 32E或API 20E或手工生化
G+杆菌
视情况而定
G+芽胞杆菌
根据涂片染色、菌落特征、简单手工生化反映鉴定
李斯特菌、棒状杆菌
API Coryne
G+球菌
触酶(+) ID Staph或手工生化
触酶(-) ID Strep或手工生化
真菌
科玛嘉显色平板或ATB ID 32C、API 20 C AUX
按检验流程、操作说明、生化反应、鉴定步骤中所述方法操作,将可疑菌落接种于相应的培养基或板条上,按要求培养足够时间后,手工或用计算机自动读取结果,打印报告。
、无细菌生长或未培养出病原菌等。
,须在使用抗生素前进行,并及时送检。
,鉴定须选用适当的反应或试剂条。
。正常无菌部位培养出细菌,有