文档介绍：天津医科大学硕士学位论文
中文摘要
目的:糖尿病(diabetes mellitus,DM)是多种因素引起的以慢性高血糖为特征的全身性代谢紊乱,可导致机体多器官系统损害的一组临床综合征。随着DM并发症研究的深入,DM肺部损害已经越来越受到关注。近年来研究证实DM肺损害也是DM全身多系统病变的一部分,DM可显著增加肺纤维化的风险。转化生长因子Dl(transforming growth factor bctal,)是促纤维化的细胞因子, 在多种器官纤维化进程中扮演重要角色。c-Jun氨基末端激酶( kinases,孙Ⅸ),:11的活性,进而改变纤维化的进程。近年研究发现,JNK过度激活与DM肝脏纤维化以及非DM肺间质纤维化密切相关,。( muscle actin,a-SMA)及I型胶原(collagen I,COL I)}1/JNK信号转导通路下游衡量肺纤维化形成的两个重要指标。罗格列***(rosiglitazone,RGT)是过氧化物酶体增殖物激活受体丫Qer0)【isome prolifcrator-activatcd receptor Y,PPAR7) 的合成配体,RGT不仅具有改善胰岛素敏感性,降低血糖的作用,还具有潜在的器官保护作用及抗纤维化的作用。本研究通过应用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)观察自发性DM大鼠—oLETF大鼠肺组织
,应用免疫蛋白印迹法(Western Blotting)观察磷酸化JNK
(phosphorylatcd c-Jun NH2-terminal kinases,p-JNK)、 I的表达变化,探讨TGF./31/JNK信号途径是否为DM肺纤维化的发病机制之一,并设立 RGT干预组,观察上述指标的变化以探讨RGT是否对DM肺纤维化具有保护作用。方法:4周龄OLETF大鼠30只和其同系非DM对照鼠LETO大鼠8只,在无特定病原体级条件下单笼饲养,饲以标准饲料。大鼠每4周行一次口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)。至30周龄时,共有成模OLETF 大鼠16只,随机分为模型组(DM组)8只和RGT干预组8只,LETO大鼠为正常对照组(N组)。RGT组每日以RGT3mg/kg的给药剂量灌胃,DM组与N 组以等量蒸馏水灌胃,各组均灌胃给药12周,每日1次。42周龄时处死大鼠, 留取肺组织,部分置于10%中***尔马林中固定,部分置于液氮中固定,.80℃低温冰箱保存后进行如下步骤:***@HE染色光镜下观察肺组织结构变化;②
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Masson染色观察肺组织胶原沉积情况;③应用ELISA法检测各组大鼠肺组织 ,并用450rim波长酶标仪测出其对应的蛋白浓度;④应用 Western Blotting半定量分析大鼠肺组织P。JNK、、COL I蛋白的表达;用凝胶图象处理系统,以B—aetin或GAPDH为内参照, 或GAPDH的比值计算蛋白的相对表达量。
结果:***@HE染色结果显示:N组大鼠肺组织结构正常;DM组大鼠肺组织结构紊乱,支气管壁增厚,肺泡隔增宽,部分肺泡腔萎缩、塌陷,肺间质增加,并有炎症细胞浸润;RGT组大鼠肺组织病变较DM组减轻,但肺组织结构未恢复到正常。②Masson染色结果显示:N组大鼠肺泡隔、细支气管、小血管周围仅有少量胶原纤维:DM组肺间质胶原纤维增多,排列紊乱;RGT组肺间质胶原沉积较DM 组减轻,但仍未恢复至正常。③、P—JNK、 及COL I表达。与N组大鼠相比,、、a-SMA及COL
I表达均显著增加(尸<),差异有统计学意义;RGT组与DM组相比,、 、 I表达减少(P<),差异有统计学意义。结论:***@OLETF大鼠肺组织出现病理结构改变,胶原沉积增多,呈现出纤维化趋势,提示肺脏亦是DM的靶器官。(奎)OLETF大鼠肺组织TGF—D1、、
及COL I表达量较LETO大鼠显著增加,。③RGT干预后OLETF大鼠肺组织病理改变明显减轻, 胶原沉积减少,、p-JNK、