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武汉大学
硕士学位论文

C-反应蛋白与冠心病的相关研究

研究生姓名:赵磊
指导教师姓名、职称:周新教授
钱士匀教授
郑芳副教授
学科专业名称:临床检验诊断学
研究方向:动脉粥样硬化的生物化学诊断

二○○五年四月
Wuhan University
Masteral Thesis

Study on the relationship between
C-reactive protein and coronary heart
disease

Masteral Candidate ZHAO Lei
Masteral Tutor Prof. ZHOU Xin
Prof. QIAN Shiyun
Vice Prof. ZHENG Fang

April 10, 2005
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学位论文作者(签名):

2005 年 4 月 10 日
硕士学位论文
中文摘要

目的(1)探讨 C-反应蛋白+1444C/T 基因多态性与 C-反应蛋白(C-reactive
protein,CRP)水平及冠心病(coronary heart disease,CHD)的关系。(2)原核表
达 C-反应蛋白的表达质粒,纯化获得保持抗原性的 C-反应蛋白,并验证其生物学
活性。
方法(1)采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技
术对 128 例冠心病患者(至少 1 支冠状动脉直径狭窄≥ 50%)和 119 名湖北地区
汉族正常人的 CRP+1444C/T 基因型和等位基因频率进行了检测,同时测定血清
超敏 C-反应蛋白(hsCRP)及血脂水平。分析不同基因型之间的血清 CRP 含量
的差异。( 2)在大肠杆菌中表达质粒 CRP-pCRT7/NT,用氨苄青霉素平板筛选转
化子,用 IPTG 诱导表达,表达产物经 SDS-PAGE 分析,并利用组氨酸亲和层析
柱纯化,Western Blotting 验证其生物学活性。
结果(1)湖北地区汉族人群中存在 CRP+1444C/T 多态性,在冠心病组中
型 %,CT型 %,对照组分别为 %和 %。冠
心病组中等位基因频率 C 和 T 分别为 %与 %,对照组中分别为 %与
%。冠心病组和对照组之间的基因型频率和等位基因频率均无显著性差异
(P>),但血清 CRP 水平在对照组不同基因型之间有显著性差异(P<),
正常个体中 CT 杂和子携带者的 CRP 型纯合子携带者的高,但本研究
并未发现正常组与 CHD组之间 CRP 基因+1444C/T的基因型和等位基因的频率
存在显著性差异,提示该基因变异可能不是中国人群 CHD 发病的易感因素。冠
心病组的血清 TC、TG、LDL-C、Lp(a)显著高于对照组,而两组间 HDL-C、ApoAI、
ApoB 的差异无显著性。( 2)成功地在大肠杆菌表达系统中表达出含 6 个组氨酸
尾的 CRP 融合蛋白,在上 SDS-PAGE 表现出一条约 30kD 的阳性条带,经组氨
酸亲和层析柱纯化后,获得 CRP 的蛋白纯品,Westen Blotting 实验证实其确实具
有 CRP 的抗原性。
结论(1)本研究首次报道中国汉族人群 C-反应蛋白(C-reactive protein,
CRP)+1444C/T 基因多态性与 CRP 水平、血清脂质水平及冠心病(CHD)的
关系,将有助于建立用于疾病预测的基于 CRP 基因型特异性的风险阈值,并在
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硕士学位论文
遗传学上澄清 CRP 同多种疾病之间的联系。( 2)CRP 可在大肠杆菌中以包涵体
形式表达,并保持其抗原性活性,为下一步 CRP 抗体及其检测试剂盒的制备打下
了基础。

关键词 C-反应蛋白基因多态性冠心病聚合酶链反应-限制性片段长度多态性克隆表
达纯化
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硕士学位论文
Abstract
Objective (1) To investigate the relationships between the +1444 C/T
polymo