文档介绍：质粒 DNA 制备 plasmid extraction
质粒简介
质粒(plasmid)是细菌内独立于染色体并能自我复制的小环状DNA分子
其大小范围从lkb至200kb以上不等。
已经在形形色色的细菌类群中发现质粒.
这些质粒都是独立于细菌染色体之外进行复
制和遗传的辅助性遗传单位。
Chromosome DNA genome
Plasmid DNA
质粒是携带外源基因进入细菌中扩增或表达的重要媒介物,这种基因运载工具在基因工程中具有极广泛的应用价值,而质粒的分离与提取则是最常用、最基本的实验技术.
质粒特性
1. 分子相对小
2. 含有高效的自主复制成分
3. 不相容性(patibility)
4. 转移性
5. 选择的标记(selective markers)
6. 限制性内切酶单一切口
质粒的结构特点
分子量相对较小
共价闭合分子
双链环状结构
具有更强的抗切割和抗变性能力
超螺旋DNA分子线性DNA分子半开环DNA分子
Plasmid vectors
表达载体
载体含有tac启动子、Lac操纵基因、SD序列、Lac I阻遏蛋白基因等
Exprssion vector
细菌收集
纯化质粒DNA
细菌培养
细菌裂解
质粒DNA的提取和纯化
质粒DNA的提取和纯化
一、细菌的培养(bacterial culture)
l   先分离单个菌落,接种到含少量适当抗生素的培养基中扩增,随着细菌的生长,质粒DNA也在自主复制。